As doenças infecciosas têm como

tratamento a utilização de antimicrobianos,

sendo o seu uso adequado uma das principais

preocupações mundiais. Eles estão entre os

fármacos mais prescritos, porém, mais de 50%

das vezes são indicados sem necessidade.

Atualmente, o uso indiscriminado dos

antimicrobianos vem sendo considerado o

terceiro maior problema de saúde pública,

favorecendo o desenvolvimento de mecanismos

de resistência e de disseminação de diversas

espécies bacterianas comensais e patogênicas

para humanos e animais. Os antimicrobianos

são substâncias químicas produzidas por

microrganismos ou de forma sintética, capazes

de inibir o crescimento ou destruir as bactérias,

baseando-se nos mecanismos de ação das

células bacterianas e em sua estrutura química.

Desde o início da utilização de antimicrobianos

se tem conhecimento da possibilidade dos

microrganismos desenvolverem mecanismos

de resistência às drogas antimicrobianas. O

uso prolongado dessas drogas pode,

gradualmente, gerar uma pressão seletiva,

atuando como crivo para supostas vantagens

microbianas que favorecem a persistência e a

circulação nos ambientes. O aparecimento da

resistência foi, é, e provavelmente continuará a

ser, um dos grandes problemas tanto no

ambiente nosocomial quanto comunitário, já

que é causada pela mutação espontânea e

recombinação de genes, que criam variabilidade

genética.Nos ecossistemas terrestres e

aquáticos os microrganismos aparecem como células livres (estado planctônico) ou

sob a forma de biofilmes ligados a suportes sólidos. Biofilmes são comunidades

bacterianas heterogêneas existentes dentro de uma matriz composta por DNA

bacteriano, proteínas e polissacarídeos e sua composição depende, muitas vezes, de

fatores ambientais, como a disponibilidade de nutrientes e estresse. A capacidade de

formação de biofilmes sobre superfícies diversas (bióticas e abióticas) têm sido

considerada como um relevante fator de virulência que contribui para a resistência de

microrganismos a diversos antimicrobianos e desinfetantes. Nos isolados ambientais,

a formação de biofilme atua auxiliando na capacidade de persistência bacteriana em

ambientes com alta salinidade, pH variável, temperatura, fontes de carbono e fluxo de

fluidos. Os ambientes aquáticos estão entre as principais fontes de troca de material

genético e de disseminação de patógenos resistentes aos antimicrobianos em

ecossistemas naturais. O rápido crescimento de cidades, aliado a condições

inadequadas de saneamento básico, incluindo o despejo de esgoto e águas residuais

hospitalares, contribuem para a contaminação de rios e lagos e disseminação de

doenças de veiculação hídrica. No Brasil, ainda permanecem necessários os estudos

sobre a diversidade das espécies bacterianas encontradas como contaminantes de

ambientes aquáticos, inclusive na região metropolitana do Rio de Janeiro onde os

mananciais originais estão cada vez mais poluídos e exauridos, afetando a qualidade

da água de abastecimento público.Os Enterococcus são considerados importantes

agentes patogênicos oportunistas e são conhecidos por causar infecções nosocomiais

e comunitárias significativas. São distribuídos para o meio ambiente através de esgoto

ou através de resíduos animais e representam um risco potencial para a saúde, devido

à sua capacidade de adquirir genes de resistência os antimicrobianos de outros

organismos no ambiente. A entrada de efluentes hospitalares pode ter um impacto

ecológico no meio aquático. Enterococcusfaecalis e Enterococcusfaecium tornaramse

agentes etiológicos particularmente importantes de infecções nosocomiais,

enquanto Enterococcushirae é conhecido por causar infecções em animais, mas

raramente é isolado de amostras clínicas.Deste modo, o trabalho apresenta como

objetivo, o isolamento e identificação de espécies de Enterococcus de água coletada

do rio Joana, próxima a uma unidade hospitalar, além da caracterização de perfis de

resistência aos antimicrobianos e capacidade de formação de biofilme em diferentes

tipos de superfícies abióticas.Foram realizadas duas coletas no ano de 2017, onde

foram obtidos 500 ml de água em cada uma e essas amostras foram provenientes do

rio Joana, pertencente a região metropolitana do Rio de Janeiro. As coletas foram

realizadas com frascos e tubos estéreis e transportadas até o Departamento de

Microbiologia e Imunologia, na Universidade do Estado do Rio de Janeiro, em um

intervalo de 1 hora entre a coleta e a chegada ao laboratório, para a realização de

análises microbiológicas.As cepas foram semeadas por esgotamento em placas

deÁgar sangue e incubadas a 37ºC por 24h. As cepas foram identificadas utilizando a

Espectrometria de Massa - MALDI-TOF e estocadas em CG medium base, acrescido

de 20% de glicerol, a -20ºC, para as análises posteriores.Os Enterococcus isolados

foram avaliados quanto à sua resistência aos antimicrobianos: Penicilina G, Ampicilina,

Imipenem, Eritromicina, Cloranfenicol, Amicacina, Ciprofloxacina, Tetraciclina,

Rifampicina, Linezolida e Vancomicina. Os testes foram feitos através do método de

disco difusão conforme preconizado pelo CLSI. As amostras que apresentaram perfil

de resistência para três ou mais classes diferentes de antimicrobianos foram

consideradas multirresistentes. Para a avaliação qualitativa do biofilme em vidro, as

amostras foram semeadas em TSB e uma padronização de 1:100 foi realizada após

24hrs. Após 48hrs o meio foi retirado e uma nova partida foi acrescentada. Este

procedimento foi repetido mais duas vezes (a cada 48hrs). Por fim, as amostras foram

classificadas com base nos seguintes padrões: I - bactérias aderidas nas laterais o

tubo de vidro e na interface entre o meio de cultura e o ar; II - bactérias aderidas nas

laterais do tubo de vidro; III – bactérias formando um anel na interface entre o meio de

cultura e o ar; e IV - ausência de bactérias aderidas. Para a avaliação semiquantitativa

do biofilme em microplaca de poliestireno, 200 ml de suspensão bacteriana foi

adicionado em placas de 96 poços e incubado por 24 horas a 37ºC. Os poços foram

lavados três vezes com PBS e foi adicionado 200 mL de metanol por 15 minutos. Em

seguida o metanol foi retirado e, após secagem em temperatura ambiente, 2% de

cristal violeta foi adicionado durante 5 minutos e a placa foi lavada com água destilada.

Foi adicionado 200 mL de ácido acético aos poços de diluição para a realização da

leitura. A absorbância (DO) de cada poço foi aferida utilizando-se espectrofotômetro

apropriado, em comprimento de onda de 570nm. As amostras foram classificadas em

quatro categorias com base na DO: não aderente - DO obtida menor ou igual a DO do

controle negativo (DOc); fracamente aderente – DOc< DO ≤ (2×) DOc; moderadamente

(2×) DOc< DO ≤ (4×) DOc e fortemente aderente – DO > (4×)DOc.A partir das duas

datas distintas das coletas de amostras de água, foram isoladas oito cepas pertencentes

ao gênero Enterococcus, sendo que as espécies identificadas foram: E. faecalis (50%,

n=4), E. faecium (25%, n=2) e E. hirae (25%, n=2). Todas as cepas isoladas (n=8)

apresentaram resistência a pelo menos um dos seguintes antimicrobianos testados:

penicilina G (50%, n=4), ampicilina (37,5%, n=3), imipenem (37,5%, n=3), eritromicina

(75%, n=6), cloranfenicol (25%, n=2), ciprofloxacina (62,5%, n=5), tetraciclina (100%,

n=8), rifampicina (62,5%, n=5), linezolida (25%, n=2). Nenhuma amostra foi resistente

à vancomicina. Foram consideradas 87,5% (n=7) das amostras.Para a avaliação

qualitativa do biofilme em vidro, apenas uma amostra (12,5%) foi classificada como

perfil II (bactérias aderidas nas laterais do tubo de vidro). Todas as outras amostras

(87,5%, n=7), foram classificadas como perfil I (bactérias aderidas nas laterais do tudo

de vidro e na interface entre o meio de cultura e o ar).Para a avaliação semiquantitativa

do biofilme em microplaca de poliestireno, quatro amostras (50%) foram classificadas

como fortemente aderentes e quatro amostras (50%) foram classificadas como

moderadamente aderentes.A presença de cepas multirresistentes de Enterococcus

spp. isoladas do rio Joana deve servir de alerta as autoridades sanitárias e de saúde

pública do estado do Rio de Janeiro, pois indica a necessidade de monitoramento da

contaminação desses ambientes aquáticos.Assim, a vigilância microbiológica

constante, incluindo a avaliação dos perfis de resistência em sistemas hídricos, como

a estudada, deve permitir detectar a ocorrência ou não da progressão do processo de

degradação por aumento da população e pela descarga ilegal de esgoto.