Viabilidade do isolamento primário de formas promastigotas de Leishmania spp. em meio de cultura de Schneider suplementado com urina masculina a 2%
O objetivo neste estudo foi discutir sobre a viabilidade do isolamento primário de Leishmania spp. em meio de cultura de Schneider suplementado com urina masculina a 2%. O isolamento primário e a manutenção de protozoários do gênero Leishmania são extensivamente empregados em ciências básicas e aplicadas. Devido à grande variedade de meios de cultura e de formas de suplementação, optamos por testar o uso do meio de Schneider suplementado com urina masculina a 2% para ser usado em nossa rotina laboratorial. Linfonodos submandibulares de 10 cães sororreagentes para Leishmania spp. por Dual-Path Platform (DPP®) e ELISA indireto foram usados nesse estudo. Cada linfonodo foi seccionado em duas partes: metade foi usada para imprint em lâmina de vidro para exame citológico e a outra parte foi macerada em placa de Petri com 700 µL do meio de cultura. Posteriormente, 500 µL da suspensão de células foram transferidos para um tubo estéril contendo 20 mL de Schneider suplementado com urina masculina a 2% (pH 7,2). Apenas uma subcultura foi feita 72 h após a inoculação. As culturas primárias e suas subculturas foram mantidas a 27º C por 15 e 12 dias, respectivamente, sendo que a cada 72 h, eram centrifugadas e uma gota de cada sedimento era observada ao microscópio óptico (100x e 400x). Das 10 amostras examinadas, quatro foram negativas em ambos os exames, duas foram positivas somente por citologia e quatro foram positivas por citologia e isolamento em meio de cultura. Importante mencionar que houve contaminação em 20% das culturas e que as técnicas não discordaram entre si (p= 0,5000), apresentando um grau de concordância substancial (Kappa= 0,62). Assim, concluímos que o meio de cultura de Schneider suplementado com 2% de urina masculina é viável para o isolamento primário de Leishmania spp.
Viabilidade do isolamento primário de formas promastigotas de Leishmania spp. em meio de cultura de Schneider suplementado com urina masculina a 2%
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DOI: 10.22533/at.ed.14220280722
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Palavras-chave: Leishmaniose visceral canina; cães; cultura de células; Saúde Única
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Keywords: Canine visceral leishmaniasis; dogs; cell culture; One Health
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Abstract:
The aim of this study was to discuss the viability of the primary isolation of Leishmania spp. in Schneider’s culture medium supplemented with 2% male urine. Primary isolation and maintenance of Leishmania protozoa are extensively employed in basic and applied sciences. Due to the wide variety of culture media and supplementation methods, we chose to test the use of Schneider's medium supplemented with 2% male urine to be used in our laboratory routine. Submandibular lymph nodes of 10 dogs seroreagent for Leishmania spp. by Dual-Path Platform (DPP®) and indirect ELISA were used in this study. Each lymph node was divided into two parts: half was used for imprinting on a glass slide for cytological examination and the other part was macerated in a Petri dish with 700 µL of the culture medium. Subsequently, 500 µL of the cell suspension was transferred to a sterile tube containing 20 mL of Schneider supplemented with 2% male urine (pH 7.2). Only one subculture was performed 72 h after inoculation. The primary cultures and their subcultures were maintained at 27º C for 15 and 12 days, respectively, and every 72 h, they were centrifuged and a drop of each sediment was observed under an optical microscope (100x and 400x). Of the 10 samples examined, four were negative in both tests, two were positive only by cytology and four were positive by cytology and isolation in culture medium. It is important to mention that there was contamination in 20% of the cultures and that the techniques did not disagree with each other (p = 0.5000), showing a substantial degree of agreement (Kappa = 0.62). Thus, we conclude that the Schneider’s culture medium supplemented with 2% male urine is viable for the primary isolation of Leishmania spp.
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Número de páginas: 15
- Alex Jhones Silva Rocha
- Graziella Borges Alves
- Laís Fernanda Bianchi
- Katia Denise Saraiva Bresciani
- Kleber Fabiano Behrend
- Paloma Pontes da Silva
- Luiz da Silveira Neto
