USO DE POLIPEPTÍDIO ELASTINA-LIKE PARA PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNA NS1 DO VÍRUS DENGUE EXPRESSA EM PLANTA
O vírus dengue atinge boa parte da
população mundial, principalmente pela falta de
antivirais e de uma vacina efetiva contra os quatro
sorotipos, o que torna o diagnóstico ainda mais
importante. O sistema vegetal tem se mostrado
adequado para expressão de proteínas
recombinantes que podem ser utilizadas como
antígenos vacinais e de diagnóstico. Além disso,
a adição de fusões às proteínas de interesse
pode aumentar seus níveis de acumulação e
facilitar a sua purificação. Este trabalho objetivou
a purificação da proteína não estrutural 1 (NS1)
do vírus dengue fusionada ao polipeptídeo
elastina-like (ELP), denominada NS1::ELP.
Para tanto, após a expressão transiente da
NS1 nas folhas de Nicotiana benthamiana foi
realizada a purificação pelo método do ciclo
de transição inversa (ITC) que dispensa o
uso de procedimentos caros de purificação
como cromatografia. A fusão à ELP permitiu a
expressão da proteína em níveis elevados e a
NS1::ELP foi purificada com sucesso utilizado
ITC com 1,2 M de NH4(SO4)2 à 23 °C.
USO DE POLIPEPTÍDIO ELASTINA-LIKE PARA PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNA NS1 DO VÍRUS DENGUE EXPRESSA EM PLANTA
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DOI: 10.22533/at.ed.11419110217
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Palavras-chave: Purificação. NS1. Nicotiana benthamiana. Vírus dengue. Proteína recombinante.
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Keywords: Purification. NS1. Nicothiana benthamiana. Dengue virus, Recombinant protein.
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Abstract:
Dengue virus affects a large part
of the world population, mainly due to the lack
of antivirals and an effective vaccine against the
four serotypes, which makes the diagnosis even
more important. The plant-based system has
been shown to be suitable for the expression
of recombinant proteins, which can be used as
vaccine and diagnostic antigens. In addition, the
fusions tags added to the proteins of interest may increase their accumulation levels and facilitate their purification. This work
aimed the purification of dengue virus nonstructural protein 1 (NS1) fused to elastinlike polypeptide (ELP) (NS1::ELP). After the transient expression of NS1 in Nicotiana
benthamiana leaves, purification by the reverse transition cycle (ITC) was performed,
avoiding the use of expensive purification methods such as chromatography. The ELP
allowed expression of the protein at high levels and NS1::ELP was successfully purified
using ITC with 1.2 M NH4
(SO4
) 2
at 23 ° C.
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Número de páginas: 15
- Kalil Andrade Mubarac Romcy
