Uso de Crioprotetores para a Preservação de Coleções Microbianas Mantidas para PD&I
O armazenamento de
microrganismos por longos períodos é
importante para a sua utilização em Pesquisa,
Desenvolvimento & Inovação (PD&I). A correta
preservação das cepas é fundamental para
evitar contaminações e mutações, podendo
levar à perda das características morfológicas,
fisiológicas e genéticas. O Laboratório de
Biotecnologia do CEPGM da PESAGRORIO
realiza exames para o diagnóstico, a
prevenção e o controle de enfermidades em
animais de produção, e mantém a “Coleção de
Microrganismos Patogênicos para Animais de
Produção”. Até 2010 as cepas eram mantidas
à -20ºC, sem crioprotetores. Porém em 2011
foi adquirido um ultrafreezer -80ºC, e 595
cepas congeladas à -20ºC foram reativadas
e avaliadas quanto à viabilidade, identidade e
pureza. Dessas, apenas 64 (10,76%) estavam
viáveis. Desde então segue-se o protocolo de
preservação à -80ºC, utilizando o Skim Milk
comercial com adição de 10% (p/v) glicerol,
que são autoclavados separadamente a
121ºC/15min, e em seguida homogeneizados e
acondicionados em criotubos de 3mL, levados
ao freezer -20ºC por 2 dias, e posteriormente
acondicionados no ultrafreezer -80ºC. Do total
de 632 cepas bacterianas isoladas de 2011 a
2018, 442 cepas (69,93%) estão preservadas
à -80ºC em Skim Milk com glicerol, e 190
(30,07%) à -20ºC em BHI com glicerol, para
futuras pesquisas. Em 2016 e 2017 foram
repicadas 427 cepas isoladas entre 2013 e 2015, que estavam mantidas à -80ºC, e
100% apresentaram-se viáveis. Os resultados indicam que o uso de crioprotetores
favoreceu a preservação e a estabilidade das cepas, tanto no congelamento à - 80ºC
como à -20ºC.
Uso de Crioprotetores para a Preservação de Coleções Microbianas Mantidas para PD&I
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Palavras-chave: Criopreservação; Skim Milk; Glicerol.
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Keywords: cryopreservation; Skim Milk; Glycerol
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Abstract:
Storage of microorganisms for long periods is important for your use in
Research, Development & Innovation. The correct preservation of strains is essential
to avoid contamination and mutations, which can lead to the loss of morphological,
physiological and genetic characteristics. The Biotechnology Laboratory of the CEPGM
of the PESAGRO-RIO performs exams for the diagnosis, prevention and control of
diseases in farm animals, and maintains the “Collection of Pathogenic Microorganisms
for Farm Animals”. Up to 2010 strains were maintained at -20ºC, without cryoprotectants.
However, in 2011, a -80ºC freezer was purchased, and 595 strains frozen at -20 ºC were
reactivated and evaluated for viability, identity and purity. Of these, only 64 (10.76%)
were viable. Since then we follow the preservation protocol at -80°C, using the Skim
Milk commercial added with 10% (w/v) glycerol, which are autoclaved separately at
121ºC/15min, and then homogenized and packed in 3mL cryotubes, taken to the
-20°C freezer for 2 days, and subsequently packed in -80°C freezer. Of the total of
632 bacterial strains isolated from 2011 to 2018, 442 strains (69.93%) are preserved
at -80°C in Skim Milk with glycerol, and 190 (30.07%) in BHI with glycerol, at -20ºC in
BHI with glycerol for future researches. In 2016 and 2017 we worked with 427 strains
isolated between 2013 and 2015, which were kept at -80°C, and 100% were viable. The
results indicate that the use of cryoprotectants favored the preservation and stability of
strains in both freezing at-80°C and at -20°C.
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Número de páginas: 15
- Clarissa Varajão Cardoso
- Helena Magalhães
- Evelize Folly das Chagas
- Helena Carla Castro
- Maíra Halfen Teixeira Liberal
- Eunice Ventura Barbosa
