TRANSFORMAÇÃO DE E. COLI DH5α PELO MÉTODO DE ELETROPORAÇÃO E EXTRAÇÃO DOS PLASMÍDEOS POR MINIPREP CASEIRA.
Através da tecnologia do DNA
recombinante, várias opções terapêuticas
foram introduzidas na medicina, possibilitando
tratamento para doenças que não podem
ser tratadas por drogas convencionais. Essa
tecnologia envolve a clonagem de DNA exógeno
em Escherichia coli. Sendo assim, o objetivo
deste trabalho é apresentar a eletroporação,
uma técnica de transformação genética em
E. coli com um conjunto de plasmídeos de
diferentes aplicações. Essa técnica foi realizada
com a cepa TOP10 previamente submetida a
um processo de eletrocompetência. A bactéria
foi submetida a campo elétrico de alta voltagem
em eletroporador, na presença do plasmídeo,
que foi incorporado ao citoplasma das células
transformantes. Uma incubação em meio LB
líquido a 37°C por 1h foi realizada, seguido
de centrifugação e uma nova incubação a
37°C por 16 h. O antibiótico do meio seletivo foi
escolhido de acordo com a marca de resistência
do plasmídeo transformado. Após o crescimento
em meio sólido, uma colônia transformante foi
inoculada em meio LB líquido seletivo a 37°C
por 16 h. A cultura líquida foi centrifugada e o
precipitado foi empregado na purificação dos
plasmídeos clonados, processo denominado
“miniprep”. A partir da execução da técnica foi
possível a obtenção de plasmídeos puros, sem
contaminação no processo de extração, e em
maior número. Portanto, foi possível concluir
que a técnica é de fácil execução e apresenta
alta eficácia para a clonagem de plasmídeos
em E. coli.
TRANSFORMAÇÃO DE E. COLI DH5α PELO MÉTODO DE ELETROPORAÇÃO E EXTRAÇÃO DOS PLASMÍDEOS POR MINIPREP CASEIRA.
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DOI: 10.22533/at.ed.22419140424
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Palavras-chave: DNA recombinante. Eletroporação. E. coli. Cepa TOP10. Miniprep.
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Keywords: Recombinant DNA. Electroporation. TOP10 E. coli. strain. Miniprep.
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Abstract:
Through the recombinant DNA
technology many therapeutic options have been
introduced into medicine, making it possible to treat diseases that can not be treated
by conventional drugs. This technology involves the exogenous DNA cloning into
Escherichia coli. The objective of this study is to introduce the electroporation which
is a technique of genetic transformation on E. coli with a set of diffenrent application
plasmids. This technique was performed on a TOP10 strain previously submitted to a
electrocompetence process. The bacterium was submitted to a high voltage electric
field in electroporator, in the presence of the plasmid, which was incorporated into
the cytoplasm of the transforming cells. A incubation in liquid LB medium at 37ºC for
1h was performed. After that a centrifugation and another incubation at 37ºC for 16h
was performed. The antibiotic from the selective medium was chosen according to
the resistance tag of the transformed plasmid. After the growth on solid medium, a
transformed colony was inoculated in liquid selective LB medium at 37ºC for 16h. The
liquid culture was centrifuged and the precipitate was used on the cloned plasmid
purification, a process known as “miniprep”. Through the execution of the technique
was possible to obtain pure plasmids with a higher number and without contamination
of the extraction process. Therefore we conclude that the technique is easily executed
and presents high efficacy to clone plasmids on E. coli.
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Número de páginas: 12
- Antônio Bruno Alves da Silva
- Martha Jéssika Oliveira Santos
- Walisson Leonidas de Albuquerque
- Carlos Roberto Koscky Paier
- Márcia Valéria Brandão dos Santos Martins
- Artur Fontenelle Lima Montenegro
