RESPOSTA TRANSCRICIONAL DE Mycoplasma hyopneumoniae A CONDIÇÕES DE ESTRESSE in vitro
Mycoplasma hyopneumoniae, agente etiológico da pneumonia enzoótica
suína, possui genoma reduzido, com poucos mecanismos de regulação conhecidos.
Apesar da escassez de ferramentas moleculares para estudos in vitro, trabalhos
anteriores demonstraram que M. hyopneumoniae é capaz de responder a nível
transcricional a condições de estresse. Objetivando o melhor entendimento dos
mecanismos que regulam sua expressão, este trabalho visa identificar genes alvo
para o controle in vitro das condições de estresse térmico e oxidativo, confirmando
a expressão diferencial de genes preditos como envolvidos nestas condições.
Portanto, foram selecionados nove genes considerados diferencialmente expressos
em análises anteriores, sendo cinco genes regulados na condição de estresse
térmico (glpK, glpF, dnaK, dnaJ e oppC), e quatro na condição de estresse oxidativo
(atpB, glyS, mglA, ftsY). Foram realizados cultivos de M. hyopneumoniae em
condições de cultivo controle, de estresse térmico e de estresse oxidativo. O RNA
total de cada cultivo foi extraído e empregado na síntese de cDNA, através de reações
de transcrição reversa (RT). Os cDNAs foram empregados como molde na reação de
PCR quantitativo (qPCR). Todos os genes alvo foram testados nas três condições de
cultivo analisadas. Foi possível demonstrar expressão diferencial em cinco genes na
condição de estresse térmico, e em três genes na condição de estresse oxidativo.
Estes resultados sugerem a ocorrência da indução da expressão gênica diferencial
em M. hyopneumoniae frente às condições de estresse testadas in vitro.
RESPOSTA TRANSCRICIONAL DE Mycoplasma hyopneumoniae A CONDIÇÕES DE ESTRESSE in vitro
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Palavras-chave: regulação gênica; RT-qPCR; estresse térmico; estresse oxidativo; cultivo celular.
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Keywords: gene regulation; RT-qPCR; heat shock; oxidative stress; cell culture.
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Abstract:
Mycoplasma hyopneumoniae, the etiological agent of porcine enzootic
pneumonia, has a small genome with few known regulatory mechanisms. Despite the
lack of in vitro molecular tools, previous studies demonstrated that M.
hyopneumoniae responds to stress conditions. To understand the mechanism that
controls gene expression in this bacterium, this paper aims to identify target genes
to in vitro control of heat shock and oxidative stress conditions, through the
confirmation of the differential gene expression of predict targets involved in these
conditions. Therefore, nine genes differentially expressed in previous analysis were
selected: five upregulated genes during heat shock (glpK, glpF, dnaK, dnaJ e oppC),
and four up (atpB, glyS e mglA) or downregulated (ftsY) genes during oxidative stress.
Cell cultures of M. hyopneumoniae were performed in standard condition, heat shock
and oxidative stress. Total RNA of each culture was extracted and cDNA synthesis
was performed by reverse transcription reactions (RT). cDNAs were used as
templates in quantitative PCR reactions (qPCR). All target genes were tested in the
three culture conditions. This approach allowed to determine that five genes are
differentially expressed during heat shock, and three genes were differentially
expressed during oxidative stress. These results suggest the induction of differential
gene expression in M. hypneumoniae during the stress conditions tested in vitro.
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Número de páginas: 15
- Gabriela Merker Breyer
