PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE LACASES PRODUZIDAS POR Pleurotus ostreatus EM CULTIVO SÓLIDO
Enzimas têm uma participação importante no mercado de produtos biotecnológicos, atuando como catalisadores específicos e de alto valor agregado. Os resíduos agroindustriais são subprodutos que apresentam potencial para serem aproveitados tanto em escala laboratorial quanto industrial. Dentro deste cenário, o presente trabalho visou utilizar a casca de arroz, resíduo gerado em grande proporção na região no sul do Estado do Tocantins, como substrato para o cultivo em estado sólido do fungo da podridão branca Pleurotus ostreatus. A casca de arroz foi aplicada utilizando como suplementos os farelos de arroz e de soja, nas proporções 70:30 e 90:10 de substrato e farelos, respectivamente, as quais foram determinadas como ótimas para a produção enzimática em estudos anteriores. Dentre as enzimas lignolíticas produzidas por P. ostreatus, a Lacase foi investigada pela oxidação do reagente ABTS, a qual se mostrou presente em cada amostra coletada na forma de quatro isoenzimas (LacA1, LacA2, LacS1 e LacS2), obtendo atividade elevada após 15 dias de cultivo (1.372,2 ± 78,2 UI/L). Lacase foi isolada do extrato bruto por cromatografia de troca iônica usando resina DEAE-Sephacel, assim como a ultrafiltragem em membrana (50kDa), sendo eficiente a purificação da LacS1 (Fator de purificação de 1,33). Eletroforese por SDS-PAGE apresentou única banda para cada amostra de isoenzima. Zimograma confirmou as bandas únicas com o substrato ABTS. Testes fisico-químicos e termodinâmicos evidenciaram as diferenças catalíticas das enzimas LacA1 e LacS1 das demais isoenzimas em relação às suas temperaturas ideais, energia de ativação e variação de entalpia.
PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE LACASES PRODUZIDAS POR Pleurotus ostreatus EM CULTIVO SÓLIDO
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Palavras-chave: Casca de Arroz. Farelo de Cereais. Enzimas Lignolíticas.
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Keywords: Rice Husk. Bran cereals. Ligninolytic Enzymes.
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Abstract:
Enzymes presents a major role in the market for biotechnological products, acting as catalysts, with high added value. Agro-industrial wastes are by-products of low added value, tough they have the potential to be applied both in laboratory and industrial scale. In this context, the present study aimed to use the rice husk, residue generated in great proportion in the Tocantins State as substrate for solid-state cultivation of white rot fungus Pleurotus ostreatus. The rice husk was applied using rice and soybean bran as supplements, in proportion of 70:30 and 90:10 substrate:bran, respectively, which were determined as the best proportions on previous studies. Among the ligninolytic enzymes produced by P. ostreatus, the laccase was investigated by oxidation of ABTS, which proved to be present in each collected sample as four isozymes (LacA1, LacA2, LacS1 e LacS2), obtaining his best after yields 15 days of cultivation (1.372,2 ± 78,2 UI/L for rice bran and 4.606,4 ± 366,6 UI/L for soybean bran). The enzyme purification was initiated with ion-exchange chromatography applying the DEAE-Sephacel resin, followed by membrane ultrafiltration, which allowed the purification of LacS1 isozymes (Purification fold of 1.33). SDS-PAGE electrophoresis confirmed a single band from each sample at the end of the purification steps, and zymography confirmed this unique bands as laccase through success with ABTS. Physical-chemical and thermodynamics tests exhibited essential catalyst differences on both LacA1 and LacS1, with different ideal temperature, activation energy and enthalpy variation.
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Número de páginas: 24
- EZEQUIEL MARCELINO DA SILVA
- Verônica Távilla Ferreira Silva
- Adriana Maria Ferreira Milagres
- Juliana Cristina da Silveira Vieira
