PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DAS AMILASES PRODUZIDAS POR Aspergillus sp. E Neurospora crassa EXO-1: IMOBILIZAÇÃO EM ALGINATO DE SÓDIO.
O complexo enzimático amilolítico é de grande importância industrial, dentre os fungos filamentosos capazes de produzir essas enzimas estão os do gênero Aspergillus, considerados excelentes produtores e o Neurospora crassa Mutante exo-1, hiperexpressor da glucoamilase. Esse estudo teve por objetivo purificar, imobilizar e caracterizar amilases produzidas por esses fungos. A α-amilase produzida pelo Aspergillus sp. apresentou purificação de 7,59x e 82,79% de rendimento. A imobilização foi realizada em alginato 3,5% e cloreto de cálcio 0,5M apresentando aproximadamente 40% de atividade até o quinto ciclo de reuso. Os valores de pH e temperatura ótimos, para as enzimas livre e imobilizada, foram 4,5 e 65°C e 4,5 e 60°C, respectivamente. Os testes de estabilidade ao pH da enzima imobilizada mantiveram valores próximos a 100%, enquanto que a livre apresentou queda de 50% da atividade em todas faixas de pH. Na estabilidade à temperatura a enzima imobilizada manteve 100% de atividade em 40°C. A enzima livre apresentou 100% de atividade em 40 e 55°C. A glucoamilase produzida pelo Neurospora crassa Mutante exo-1 apresentou purificação de 1,75x com 31,27% de rendimento. Para a imobilização foram utilizados alginato 4% e cloreto de cálcio 0,1M, mantendo 35% da atividade no sexto ciclo. Os valores de pH e temperaturas ótimos obtidos para a enzima livre e imobilizada foram de pH5,0 e 65°C e pH5,5 e 55°C, respectivamente. Na estabilidade ao pH a enzima livre apresentou estabilidade em pH4,0-8,0, já a enzima imobilizada reteve menos de 20% da atividade em todos os pH. A enzima livre reteve aproximadamente 100% de sua atividade a 40 e 45°C, enquanto que a imobilizada reteve menos de 15% da atividade em todas as temperaturas no teste de estabilidade à temperatura. A imobilização enzimática em alginato pode ser promissora por ser de fácil processamento e pela possibilidade de recuperação e reutilização da enzima.
PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO BIOQUÍMICA DAS AMILASES PRODUZIDAS POR Aspergillus sp. E Neurospora crassa EXO-1: IMOBILIZAÇÃO EM ALGINATO DE SÓDIO.
DOI: 10.22533/at.ed.049202304
Palavras-chave: amilase, fungos filamentosos, imobilização enzimática
Keywords: amylase, filamentous fungi, enzymatic immobilization
Abstract:
The amylolytic enzyme complex has a great industrial importance, among the filamentous fungi capable of producing these enzymes are those of the genus Aspergillus, considered excellent producers and the Neurospora crassa Mutant exo-1, glucoamylase hyperexpressor.This study aimed to purify, immobilize and characterize amylases produced by these fungi. The α-amylase produced by Aspergillus sp. obtained purification of 7.59 fold and 82,79% yield. The immobilization was carried out in alginate 3.5% and calcium chloride 0.5M presenting approximately 40% activity up to fifth reuse cycle. The optimum pH and temperature values, for free and immobilized enzymes, were 4.5 and 65°C and 4.5 and 60°C, respectively. The pH stability tests of the immobilized enzyme remained close to 100% while the free form showed 50% decrease in activity in all pH ranges. In the temperature stability the immobilized enzyme maintained 100% activity at 40°C. The free enzyme showed 100% activity at 40 and 55°C. Glucoamylase produced by Neurospora crassa Mutant exo-1 showed a purification of 1.75 fold and 31.27% yield. For the immobilization were used 4% of alginate and 0.1M calcium chloride, maintaining 35% of the activity in sixth cycle. The optimum pH and temperatures values obtained for the free and immobilized enzymes were pH5.0 and 65°C and pH5.5 and 55°C, respectively. In pH stability test the free enzyme demonstrated great stability at pH4.0-8.0, the immobilized enzyme retained less than 20% of activity at all pH. The free enzyme retaining approximately 100% of its activity at 40 and 45°C, while immobilized retained less them 15% of activity at all temperatures in temperature stability test. Enzymatic immobilization in alginate can be promising because it is easy to process and possibility of recovery and reuse of the enzyme.
Número de páginas: 63
- Evelyn de Andrade Salomão
