PROSPECÇÃO DE GENES DE REFERÊNCIA PARA qPCR EM PEIXE-REI (Odontesthes humensis): CLONAGEM, SEQUENCIAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DO GENE DA β-ACTINA
Utilizados como controle interno da técnica de qPCR, os genes de
referência devem obrigatoriamente exibir um padrão de constitutiva para a obtenção
de um resultado fidedigno. As actinas são proteínas altamente conservadas e a
evolução desta família gênica tem sido bastante estudada, tendo o gene da isoforma
β recebido destaque devido ao seu caráter de manutenção. Dentre as espécies de
teleósteos com potencial aquículo, destaca-se o peixe-rei (Odontesthes humensis), o
qual pertence à família Atherinopsidae, sendo extremamente exigente em termos de
qualidade de água. Sendo assim, este animal vem recebendo atenção de
pesquisadores, pois, quando submetido a uma situação de estresse, o mesmo acaba
respondendo de maneira em que sua maquinaria molecular seja direcionada à sua
sobrevivência. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo a clonagem
molecular, o sequenciamento e a caracterização do gene da β-Actina em peixe-rei.
Foi realizado a confecção de primers específicos para a amplificação da β-Actina.
Após, foi realizada a clonagem molecular deste gene através da PCR com gradiente
de temperatura e posterior sequenciamento do mesmo através do método de
Sequenciamento de Sanger automatizado.
PROSPECÇÃO DE GENES DE REFERÊNCIA PARA qPCR EM PEIXE-REI (Odontesthes humensis): CLONAGEM, SEQUENCIAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DO GENE DA β-ACTINA
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Palavras-chave: Genes de referência, PCR, β-Actina e Sequenciamento
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Keywords: Reference gene, PCR, β-Actin and Sequencing.
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Abstract:
Used as internal control of the qPCR technique, the reference genes must
necessarily exhibit a constitutive standard to obtain a reliable result. Actins are highly
conserved proteins and the evolution of this gene family has been studied, having
the β isoform gene received prominence due to its housekeeping function. Among
the species of teleosts with potential aquiculture, the pejerrey (Odontesthes
humensis), which belongs to the family Atherinopsidae, being extremely demanding
in terms of water quality. Thus, this animal has been receiving attention from
researchers, since, when subjected to a stress situation, it ends up responding in a
way that its molecular pathways are directed to the fish survival. In this context, this
work aimed the molecular cloning, sequencing and characterization of the β-Actin
gene in pejerrey. Was realized the preparation of specific primers for the amplification
of β-Actin. Then, the molecular cloning of this gene was performed by PCR with
temperature gradient and subsequent sequencing through the automated Sanger
Sequencing method.
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Número de páginas: 15
- Annielson de Souza Costa
