PRODUÇÃO DE ASPARAGINASE BACTERIANA DE Helicobacter pylori, Proteus vulgaris E Wolinella succinogenes EM SISTEMA DE EXPRESSÃO PROCARIOTO
Asparaginase é uma enzima que
catalisa a conversão de asparagina em aspartato
e amônia. Essa enzima é usada no tratamento
de cânceres como a leucemia linfótica aguda
(ALL), cujas células perdem a capacidade de
sintetizar asparagina nova, sofrendo apoptose
quando os níveis de asparagina sanguínea
sofrem rápida diminuição. Apesar do sucesso
da quimioterapia, vários estudos apontam
para alterações tardias em diversos órgãos e
sistemas de pacientes com ALL, além de relatos
de hipersensibilidade e inativação ao tratamento
para a doença. A principal asparaginase
utilizada nos tratamentos é proveniente do
microrganismo Erwinia chrysanthemi. Diversas
modificações foram feitas na estrutura dessa
asparaginase com o intuito de reduzir sua
imunogenicidade e/ou atividade glutaminásica,
tonando-a mais eficiente e diminuindo, assim,
os efeitos colaterais para os pacientes. Assim
faz-se necessário pesquisas constantes para
aprimoramento dos tratamentos existentes
e formulação de medicamentos alternativos
para a doença. Desta forma, neste estudo
asparaginases de três microrganismos
(Helicobacter pylori, Proteus vulgaris, Wolinella
succinogenes) com sequências de aminoácidos
conhecidas foram selecionadas com o objetivo
de produzir asparaginase recombinante com
características ideais, como a afinidade por
asparagina próxima aos valores encontrados
para a asparaginas produzida em em E. coli e
E. chrysanthemi, baixa afinidade por glutamina
e meia vida adequada. As três asparaginases
foram clonadas e expressas em E. coli BL21 (DE3) com sucesso e serão avaliadas por testes de atividade enzimática e citotoxicidade
para o desenvolvimento de um biofámaco nacional com atividade enzimática eficaz
PRODUÇÃO DE ASPARAGINASE BACTERIANA DE Helicobacter pylori, Proteus vulgaris E Wolinella succinogenes EM SISTEMA DE EXPRESSÃO PROCARIOTO
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DOI: 10.22533/at.ed.11419110213
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Palavras-chave: Asparaginase. Leucemia Linfoblástica Aguda (ALL). Expressão bacteriana.
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Keywords: Asparaginase. Acute Lymphocytic Leukemia (ALL). Bacterial Expression.
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Abstract:
Asparaginase is an enzyme that catalyzes the conversion of asparagine
into aspartate and ammonia. This enzyme is used in the treatment of cancers such
as acute lymphocytic leukemia (ALL), whose cells lose the ability to synthesize new
asparagine, undergoing apoptosis when blood asparagine levels decrease rapidly.
Despite the success of chemotherapy, several studies point to late alterations in various
organs and systems of patients with ALL, as well as reports of hypersensitivity and
inactivation of treatment for the disease. The main asparaginase used in the treatments
comes from the microorganism Erwinia chrysanthemi. Several modifications were
made in the structure of this asparaginase in order to reduce its immunogenicity and /
or glutaminase activity, making it more efficient and thus reducing the side effects for
the patients. Thus, constant research is needed to improve existing treatments and
formulate alternative medicines for the disease. Therefore, in this study asparaginases
of three microorganisms (Helicobacter pylori, Proteus vulgaris, Wolinella succinogenes)
with known amino acid sequences were selected with the aim of producing recombinant
asparaginase with ideal characteristics, such as asparagine affinity close to the
values found for asparagines produced in E. coli and E. chrysanthemi, low affinity for
glutamine and adequate half-life. The three asparaginases were successfully cloned
and expressed in E. coli BL21 (DE3) and will be evaluated by enzymatic activity and
cytotoxicity tests for the development of a national biopharmaceutical with effective
enzymatic activity
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Número de páginas: 15
- Kalil Andrade Mubarac Romcy
- Davi Almeida Freire
- Lívia Érika Carlos Marques
- Eridan Orlando Pereira Tramontina Florean
- Maria Izabel Florindo Guedes
- Ilana Carneiro Lisboa Magalhães
