OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLOS PARA A EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO EM Physalis L.
As espécies, pertencentes ao gênero Physalis L., são importantes porque fornecem frutos comestíveis e uma grande diversidade de bio-produtos, que têm um amplo espectro de atividades biológicas. Diante da importância da cultura tornam-se necessários estudos moleculares para analisar a diversidade genética. A obtenção de DNA de boa qualidade é pré-requisito fundamental para o sucesso em análises moleculares. Nesse contexto, o trabalho proposto tem por objetivo testar protocolos de extração de DNA e estabelecer o que apresente uma maior quantidade e qualidade de DNA genômico de Physalis, para fins de análise de divergência genética via marcadores moleculares. Foram testados dois protocolos para extração de DNA, o proposto por Doyle e Doyle (1990) e Santos et al. (2014). A verificação da qualidade e quantidade do DNA foi realizada através de eletroforese em gel de agarose a 0,8%, as amostras foram coradas com GelRed, e a eletroforeses a uma voltagem igual a 60W por 1hora. As amostras foram visualizadas através do sistema de fotodocumentação e a quantificação do DNA foi realizada por comparação com o DNA Fago lambda de concentração conhecida. Ao analisar a integridade do DNA extraído com o protocolo proposto por Doyle e Doyle (1990) se mostrou insatisfatório para a extração de DNA de Physalis L. O protocolo 2 , Santos et al. (2014), produziu DNA de boa qualidade para todas as formas de armazenamento do material vegetal testadas para Physalis L., não havendo contaminação e degradação. O tampão com o CTAB na concentração de 10% foi eficiente para a extração de DNA no protocolo 2 quando comparado com o tampão de extração de concentração de 5% de CTAB do protocolo 1. Entre os dois protocolos testados neste trabalho tendo como base o método CTAB o que apresentou melhor resultado foi o de Santos et al (2014). A aplicação de CTAB na concentração de 10% foi mais efetivo no isolamento de DNA para physalis L. Sendo assim, o Protocolo 2 ( Santos et al.,2014) é o mais indicado para trabalhos com extração de DNA de Physalis L.
OTIMIZAÇÃO DE PROTOCOLOS PARA A EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO EM Physalis L.
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DOI: 10.22533/at.ed.35721280513
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Palavras-chave: Quantificação de DNA, Variabilidade genética, Biotecnologia
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Keywords: DNA quantification, Genetic variability, Biotechnology
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Abstract:
The species, belonging to the genus Physalis L., are important because they provide edible fruits and a great diversity of bio-products, which have a wide spectrum of biological activities. Given the importance of culture, molecular studies are needed to analyze genetic diversity. Obtaining good quality DNA is a fundamental prerequisite for successful molecular analysis. In this context, the proposed work aims to test protocols for DNA extraction and to establish what presents a greater quantity and quality of Physalis genomic DNA, for the purpose of analyzing genetic divergence via molecular markers. Two protocols for DNA extraction were tested, the one proposed by Doyle and Doyle (1990) and Santos et al. (2014). DNA quality and quantity verification was performed using electrophoresis on 0.8% agarose gel, as they were stained with GelRed, and electrophoresis at a voltage equal to 60W for 1 hour. The samples were visualized through the photo-documentation system and the quantification of the DNA was performed by comparison with the DNA Phage lambda of known concentration. When analyzing the integrity of the extracted DNA with the protocol proposed by Doyle and Doyle (1990), it was unsatisfactory for the DNA extraction of Physalis L. Protocol 2, Santos et al. (2014), produced good quality DNA for all forms of storage of plant material tested for Physalis L., with no contamination and degradation. The buffer with the CTAB at a concentration of 10% was efficient for the extraction of DNA in protocol 2 when compared with the buffer of concentration of 5% of CTAB of protocol 1. Among the two protocols tested in this work based on the method CTAB that presented the best result was that of Santos et al (2014). The application of CTAB at a concentration of 10% was more effective in isolating DNA for physalis L. Therefore, Protocol 2 (Santos et al., 2014) is the most suitable for works with DNA extraction from Physalis L.
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Número de páginas: 8
- André Pinto Lima
- Rafael Cruz Cordeiro
- Maryelle Vanilla de Abreu Cerqueira
- Jéssica Barros Andrade
- Aparecida Gomes Feitosa
- Joseane Inacio da Silva Moraes
- Hortência Kardec Da Silva
