OBTENÇÃO DE CONSTRUÇÃO GENÉTICA PARA NOCAUTE DO GENE OSDREB1C EM PLANTAS DE ARROZ (ORYZA SATIVA L.) UTILIZANDO CRISPR/CAS9 - Atena EditoraAtena Editora

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OBTENÇÃO DE CONSTRUÇÃO GENÉTICA PARA NOCAUTE DO GENE OSDREB1C EM PLANTAS DE ARROZ (ORYZA SATIVA L.) UTILIZANDO CRISPR/CAS9

A agricultura enfrenta o desafio de aumentar a produção de alimentos para uma população que cresce exponencialmente, mesmo diante dos desafios impostos pelas mudanças climáticas. A escassez de água leva a uma oscilação na disponibilidade para as culturas, afetando seu pleno desenvolvimento e conseguinte produtividade. A ciência tem buscado entender os mecanismos envolvidos na tolerância à seca em plantas para desenvolver genótipos cada vez mais tolerantes. Nessa mesma linha, o objetivo do trabalho foi utilizar a técnica de edição gênica CRISPR/Cas9 para obtenção de uma construção genética visando o nocaute do gene OsDREB1C, um promissor candidato a aumentar a tolerância à seca em plantas de arroz (Oryza sativa L.). Para tanto, foram desenhados e clonados no vetor pRGEB31 espaçadores específicos para o OsDREB1C na porção 5’ do backbone do gRNA. O plasmídeo foi multiplicado em E. coli e purificado para posterior confirmação por ensaio de restrição com as enzimas BsaI e SacI e sequenciamento Sanger. O sequenciamento confirmou a clonagem e integridade do espaçador, confirmando uma construção íntegra para ser usada na transformação de plantas de arroz. Assim, conclui-se que foi possível obter uma construção íntegra para o nocaute do gene OsDREB1C. A análise das plantas contendo essa construção permitirá estudar as funções desse fator de transcrição em plantas submetidas a estresse hídrico.
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OBTENÇÃO DE CONSTRUÇÃO GENÉTICA PARA NOCAUTE DO GENE OSDREB1C EM PLANTAS DE ARROZ (ORYZA SATIVA L.) UTILIZANDO CRISPR/CAS9

  • Palavras-chave: biotecnologia; estresse hídrico; fator de transcrição.

  • Keywords: biotechnology; water stress; transcription factor.

  • Abstract: Agriculture faces the challenge of increasing food production for an exponentially growing population, even in the face of the challenges imposed by climate change. Water scarcity leads to fluctuations in water availability for crops, affecting their full development and consequent productivity. Science has sought to understand the mechanisms involved in drought tolerance in plants in order to develop increasingly tolerant genotypes. Along the same lines, the objective of this study was to use the CRISPR/Cas9 gene editing technique to obtain a genetic construct aimed at knocking out the OsDREB1C gene, a promising candidate for increasing drought tolerance in rice plants (Oryza sativa L.). To this end, specific spacers for OsDREB1C were designed and cloned into the pRGEB31 vector in the 5' portion of the gRNA backbone. The plasmid was multiplied in E. coli and purified for later confirmation by restriction assay with the enzymes BsaI and SacI and Sanger sequencing. Sequencing confirmed the cloning and integrity of the spacer, confirming an integral construct to be used in the transformation of rice plants. Thus, it is concluded that it was possible to obtain an integral construct for the knockout of the OsDREB1C gene. The analysis of plants containing this construct will allow studying the functions of this transcription factor in plants subjected to water stress.

  • Everaldo Zonta
  • Maria Eduarda Pimentel de Melo
  • Dandara Veríssimo Soprani
  • Clenya Carla Leandro de Oliveira
  • Castro Alves da Silva Junior
  • Erinaldo Gomes Pereira
  • Leandro Azevedo Santos
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