NOVO USO PARA O FILTRO EM PROFUNDIDADE CLARISOLVE® EM SUBSTITUIÇÃO À CENTRIFUGAÇÃO CLÁSSICA NA PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS POR PRECIPITAÇÃO SELETIVA
A precipitação seletiva de proteínas é largamente utilizada na produção de biofármacos. A vacina de hepatite B (recombinante) do Instituto Butantan é composta pela proteína recombinante de superfície do vírus, antígeno S (HBsAg). No processo de purificação das partículas semelhantes ao vírus (VLPs), o precipitado de proteínas da cepa hospedeira (HCPs) é atualmente removido por centrifugação contínua. Os filtros de profundidade Clarisolve® são apresentados como ferramentas eficientes para clarificar culturas celulares de alta densidade. Nós avaliamos os filtros Clarisolve® 20MS, 40MS e 60HX, comparando os filtrados com o controle centrifugado, a fim de verificar a viabilidade do seu uso como técnica alternativa na remoção de precipitados de proteínas. Os desempenhos foram similares e satisfatórios em termos do aumento de pressão ao longo do procedimento, bem como turbidez, OD280, perfil eletroforético, conteúdo de proteínas total/específica e de DNA residual do filtrado. O filtro 40MS foi selecionado para um desafio de alto fluxo, compatível com as necessidades da escala industrial. Houve um incremento de pressão exponencial no final da corrida, embora estivesse bastante aquém do limite de pressão do filtro e sem impacto na qualidade do filtrado. Desta forma, 40MS foi considerado o candidato ideal para substituir a centrifugação na remoção de HCPs.
NOVO USO PARA O FILTRO EM PROFUNDIDADE CLARISOLVE® EM SUBSTITUIÇÃO À CENTRIFUGAÇÃO CLÁSSICA NA PURIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS POR PRECIPITAÇÃO SELETIVA
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DOI: 10.22533/at.ed.42721061219
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Palavras-chave: filtro de profundidade, precipitação seletiva de proteínas, clarificação
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Keywords: depth filter, selective protein precipitation, clarification
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Abstract:
Selective protein precipitation is widely used in the production of biopharmaceuticals. Butantan Institute’s hepatitis B vaccine is composed by the virus recombinant surface S-antigen (HBsAg). Continuous centrifugation is currently used to remove host cell proteins (HCPs) precipitates in the virus-like particles (VLPs) purification process. Clarisolve® depth filter is presented as an efficient tool to clarify high-density cell cultures. We evaluated 20MS, 40MS and 60HX Clarisolve® units against centrifugation (control) in order to verify its feasibility as an alternative technique to protein precipitates removal. They presented similar and satisfactory performance in terms of pressure along the procedure and also filtrate’s turbidity, OD280, total/specific protein, electrophoretic profile and DNA content. The 40MS media was selected for a high-flow challenge, compatible with industrial production demand. Resistance increased exponentially at the end, even though far from the limit pressure, with no impact on filtrate quality. Therefore, 40MS was considered the ideal candidate to replace HCP clearance by centrifugation.
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Número de páginas: 15
- Bruna de Almeida Rocha
- Alexandre Bimbo
- Juliana Roquetti dos Santos
- Elisabeth Christina Nunes Tenório
- Victor Gabriel Abramant de Sousa
- MIRIAN NAKAMURA GOUVEA
