MULTIPLEX PCR FOR THE DETECTION OF DIARRHEAGENIC Escherichia coli PATHOTYPES IN CHILDREN WITH ACUTE DIARRHEA
Doenças do trato gastrointestinal têm uma distribuição global, afetando principalmente crianças. Nos países em desenvolvimento, figuram como importante causa de morbimortalidade, considerando-se a etiologia bacteriana. Enterobacterias, como as Escherichia coli patogênicas, são reconhecidas como importantes agentes etiológicos estando estreitamente ligadas as formas endêmicas de diarreia infantil. O objetivo deste trabalho foi isolar e caracterizar patotipos de E. coli a partir de culturas de amostras fecais de pacientes com diarreia atendidos em Unidades de Saúde Pública e de pessoas saudáveis (grupo controle). Foram avaliadas 239 amostras de fezes (152 diarréicas e 87 controles). Para o isolamento de bactérias enteropatogênicas, utilizou-se meios seletivos indicadores e de enriquecimento. A caracterização bioquímica foi realizada utilizando os Sistemas API-20E e a sorológica, através de antissoros polivalentes e monovalentes. Para a detecção das categorias patogênicas de E. coli (EPEC- E. coli enteropatogênica, ETEC- E. coli enterotoxigênica, STEC- E. coli produtora de toxina de Shiga, EIEC- E. coli enteroinvasora e EAEC-E. coli enteroagregativa) foram executados ensaios de PCR Multiplex (M-PCR) utilizando-se primers específicos para cada fator de virulência. Quanto às categorias patogênicas de E. coli, a ETEC 7,2% (12/152) foi o patotipo mais frequente nos casos de diarreia aguda, seguido de EAEC 5,9% (9/152), enquanto nos controles, a maior proporção 9,2% (8/87) foi representada pela EAEC seguido de EPEC 2,3% (2/87). Das oito E. coli enteropatogênicas (EPEC) identificadas, apenas uma foi EPEC típica e das doze E. coli enterotoxigênica (ETEC) isoladas, cinco apresentaram os genes codificadores de ST, quatro de LT e ST e três de LT. Os ensaios da PCR multiplex mostraram-se, portanto uma ferramenta importante na identificação rápida das categorias de E. coli patogênicas, podendo ser utilizados rotineiramente no diagnóstico molecular dessas categorias.
MULTIPLEX PCR FOR THE DETECTION OF DIARRHEAGENIC Escherichia coli PATHOTYPES IN CHILDREN WITH ACUTE DIARRHEA
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Palavras-chave: Escherichia coli patogênica, diarreia; PCR Multiplex
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Keywords: Pathogenic Escherichia coli, diarrhea; Multiplex PCR.
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Abstract:
Gastrointestinal tract diseases have a global distribution, affecting mainly children. In developing countries, they are important cause of morbidity and mortality, considering the bacterial etiology. Enterobacteria, as pathogenic Escherichia coli, are recognized as important etiology agents, being closely linked to endemic forms of childhood diarrhea. The objective of this work was to isolate and characterize E. coli pathotypes from fecal samples culture from diarrhea patients and healthy people (control group) attended at Public Health Units. 239 fecal samples were evaluated (152 diarrhea and 87 controls). For the isolation of enteropathogenic bacteria, we used selective indicator and enrichment media. Biochemical characterization was performed using API-20E Systems and serological through polyvalent and monovalent antisera. For the detection of pathogenic categories of E. coli (EPEC-enteropathogenic E. coli, ETEC-enterotoxigenic E. coli, STEC-Shiga toxin producer E. coli, EIEC-enteroinvader E.coli and EAEC-enteroaggregative E. coli) multiplex PCR assays (M-PCR) were performed using specific primers for each virulence factor. As for the pathogenic categories of E. coli, ETEC 7.2% (12/152) was the most common pathotype in cases of diarrhea followed by EAEC 5.9% (9/152), while in controls, the highest proportion 9.2% (8/87) was represented by EAEC followed by EPEC 2.3% (2/87). Of the eight enteropathogenic E. coli (EPEC) identified, only one was typical EPEC and of the twelve enterotoxigenic E. coli (ETEC) isolates, five presented the ST-coding genes, four from LT and ST and three from LT. The multiplex PCR assays was therefore showed as important tools in the rapid identification of pathogenic E. coli categories, and can be routinely used in the molecular diagnosis of these categories.
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Número de páginas: 15
- Daniela Cristiane da Cruz Rocha
- Anderson Nonato do Rosario Marinho
- Karina Lúcia Silva da Silva
- Edvaldo Carlos Brito Loureiro
- Eveline Bezerra Sousa
