MATRIZ EXTRACELULAR PANCREÁTICA DESCELULARIZADA PARA CRIAÇÃO DE UM BANCO E FUTURA UTILIZAÇÃO EM ENGENHARIA TECIDUAL.
Introdução: Estudos mostram que a matriz extracelular (ECM) desempenha papel fundamental na migração e expressão fenotípica de células residentes, influenciando proliferação e diferenciação celular através da transdução de sinais. Desenvolvemos estudos visando à obtenção de arcabouços pancreáticos descelularizados, Engenharia Tecidual e geração de um pâncreas bioartificial. Objetivo: Avaliar a estabilidade de matrizes pancreáticas descelularizadas para reconstrução pancreática. Métodos: Pâncreas murino (n=12) foram extraídos, descelularizados por perfusão com solução detergente/enzima, caracterizados quanto à ausência de células e preservados sob três condições diferentes: a) tampão salino-fosfato - sem cálcio ou magnésio (PBSA) à 4°C; b) PBSA suplementado com antibióticos e antimicóticos à 4°C (PBSA-AA); c) CRIO: meio RPMI 1640 contendo 10% de dimetilsulfóxido (DMSO) e 10% de soro fetal bovino (FBS) à -80 °C. Amostras foram retiradas para análise histológica após 1, 2, 4, 8, 12 e 16 semanas de incubação. Resultados: A análise histológica indicou ausência de células e manutenção da arquitetura nativa da ECM pancreática até o final do período de armazenamento avaliado, em todas as condições, bem como a manutenção da rede de colágeno. Observou-se também a perda gradativa da coloração correspondente aos proteoglicanos e glicosaminoglicanos, ao longo deste período, em todos os meios de preservação, sendo menos acentuada na solução CRIO. Esses achados foram confirmados através de avaliação da ultraestrutura das amostras e dosagem de proteínas totais no sobrenadante. Conclusão: Durante o período de uma semana, não foram encontradas diferenças significativas nas condições de preservação utilizadas, mas a condição mais favorável foi a manutenção dos arcabouços em meio CRIO à -80°C por um período de até quatro semanas. Conhecendo a melhor condição de preservação e tempo limite de manutenção destes arcabouços permitirá a criação de um Banco e aperfeiçoamento das tecnologias para geração de um pâncreas bioartificial parcial ou totalmente funcional.
MATRIZ EXTRACELULAR PANCREÁTICA DESCELULARIZADA PARA CRIAÇÃO DE UM BANCO E FUTURA UTILIZAÇÃO EM ENGENHARIA TECIDUAL.
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DOI: 10.22533/at.ed.3802122024
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Palavras-chave: Descelularização pancreática, Matriz extracelular/arcabouço pancreático, Engenharia Tecidual, Banco de matriz pancreática descelularizada, pâncreas bioartificial
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Keywords: Pancreatic decellularization, pancreatic extracellular matrix/scaffold, Tissue Engineering, pancreatic extracellular matrix Bank, Bioartificial pancreas
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Abstract:
Introduction: Studies show that the extracellular matrix (ECM) plays a crucial role in cell migration and phenotypic expression, influencing proliferation and differentiation through signal transduction. We undertook studies aiming at generating descelullarized pancreatic scaffolds. Objectives: To evaluate the stability of descellularized rat pancreatic matrices for pancreatic reconstruction. Methods: murine pancreata (n=12) were extracted, decellularized by perfusion with a detergent/enzyme mixture, characterized with respect to cells removal and preserved under three different conditions: a) saline-phosphate without calcium or magnesium (PBSA) at 4°C; b) PBSA supplemented with antibiotics and antimicotic (PBSA-AA); c) CRIO solution: RPMI 1640 medium containing 10% dimethylsulphoxide (DMSO) and 10% fetal bovine serum (FBS) at -80°C for four weeks. Histological analysis was carried out at 1, 2, 4, 8, 12 and 16 weeks of incubation. Results: The histological analysis revealed the absence of cells and maintenance of the native pancreatic ECM architecture throughout the observation period, under all conditions, as well as maintenance of the collagen network. Gradual loss of proteoglycans and glycosaminoglycans staining was also observed under all conditions, being less pronounced for the CRIO condition. These findings were confirmed by evaluation of the samples ultrastructure and of the amount of proteins present in the supernant. Conclusions: No significant differences were found among the different preservation conditions during the first week, however, the most favorable condition was maintenance of the scaffolds under the CRIO condition, for a period of up to four weeks. Better understanding of the preservation and time-limit conditions for maintenance of these scaffolds should open the way for construction of a Scaffolds Bank and perfection of the technologies allowing the generation of a functional bioartificial pancreas.
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Número de páginas: 15
- Tatiane Vieira Fonseca
- Nilsa Regina Damaceno-Rodrigues
- Elia Tamaso Espin Garcia Caldini
- Mari Cleide Sogayar
- Marluce da Cunha Mantovani
