LEVEDURAS DO TRATO DIGESTÓRIO DE Anopheles darlingi COMO ALTERNATIVA PARA O DESENVOLVIMENTO DE PARATRANSGÊNESE PARA O CONTROLE DA MALÁRIA
Microrganismos contidos no trato digestório de insetos vem sendo isolados e identificados com o intuito de desenvolver ferramentas biotecnológicas para o controle de doenças transmitidas por esses animais. Nesse contexto, mosquitos Anopheles de diferentes partes do globo têm sua microbiota investigada com foco em paratransgênese. No entanto, começa a ser desvendada a informação sobre microrganismos associados aos anofelinos neotropicais, especialmente Anopheles darlingi. Relatamos nesse trabalho o isolamento e a identificação de leveduras cultiváveis, com potencial para paratransgênese, isoladas das fezes de An. darlingi, o principal vetor da malária no Brasil. As fêmeas de mosquitos An. darlingi foram coletadas em localidades rurais de Porto Velho, Rondônia, Brasil. Para favorecer o crescimento de leveduras, fezes dos mosquitos foram coletadas em meio YPD ágar com cloranfenicol e cultivadas à 30°C por 48 horas. Sessenta colônias leveduriformes foram amostradas. Os isolados foram preservados em freezer -80 °C. Foram realizadas PCR utilizado DNA genômico dos isolados com iniciadores para a região do DNA ribossomal 26S e ITS. Das 60 leveduras isoladas, 27 foram identificadas. Os fragmentos foram sequenciados pelo método Sanger e as sequências com similaridades superiores a 97% frente a sequências disponíveis em bancos de dados foram depositadas no GenBank. As leveduras identificadas pertencem a 9 gêneros: Candida, Diutina, Hanseniaspora, Metschnikowia, Meyerozyma (=Pichia), Moesziomyces, Papiliotrema (=Cryptococcus), Pseudozyma e Rhodotorula. Sugere-se como candidatas à paratransgênese para o controle da malária em An. darlingi as leveduras dos gêneros Meyerozyma (Pichia), Metschkowia, Hanseniaspora e Pseudozyma.
LEVEDURAS DO TRATO DIGESTÓRIO DE Anopheles darlingi COMO ALTERNATIVA PARA O DESENVOLVIMENTO DE PARATRANSGÊNESE PARA O CONTROLE DA MALÁRIA
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DOI: 10.22533/at.ed.4702003087
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Palavras-chave: Microbiota de mosquito. Identificação molecular. 26S rRNA. ITS. Amazônia brasileira.
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Keywords: Mosquito microbiota. Molecular identification. 26S rRNA. ITS. Brazilian Amazon.
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Abstract:
Microrganisms living in insects’ digestive tract have been isolated and identified for developing biotechnological tools to fight vector-born diseases. In this context, mosquitoes Anopheles from different regions around the world have been studied about their midgut microbiota focused on paratransgenesis. However, we started to understand the information about microrganisms living in neotropical mosquitoes midgut, specially about Anopheles darlingi. The first step for paratransgenesis is to isolate culturable microrganisms naturally associated to the insect vector, and thus amenable to experimentation in laboratory. The objectives of this work were to isolate and to identify culturable yeasts isolated from feces of Anopheles darlingi, the main vector of malaria in Brazil; to estimate the frequency distribution of the sampled yeasts and to characterize and to select among the yeasts isolated from feces of An. darlingi those with potential for paratransgenesis. The female mosquitoes of An.darlingi were captured in two rural places of Porto Velho, Rondônia, Brasil. For improving the yeast growth, mosquito feces were collected on YPD agar medium with chloramphenicol and cultivated at 30 ºC for 48 hours. Sixty pure yeast colonies were sampled. The isolates were preserved in -80 ºC freezer. PCR reactions with genomic DNA from each isolate were perfomed using the primers of 26S and ITS for yeasts. From 60 yeast isolates, just 27 samples were identified. The fragments were sequenced with the Sanger method and the sequences with similarities above of 97% with sequences in reference database were deposited in Genbank (NCBI). The identified yeast fall into 9 genera: Candida, Diutina, Hanseniaspora, Metschnikowia, Meyerozyma (=Pichia), Moesziomyces, Papiliotrema (=Cryptococcus), Pseudozyma and Rhodotorula. We suggest as candidates to paratransgenesis to control of malaria in An. darlingi those yeasts belonging to the genera Meyerozyma (=Pichia), Metschnikowia, Hanseniaspora and Pseudozyma.
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Número de páginas: 16
- Antonio dos Santos Júnior
- Gabriel Eduardo Melim Ferreira
- Juliana Conceição Sobrinho
- Luiz Shozo Ozaki
- Alexandre Almeida e Silva
- Andrelisse Arruda
