ISOLAMENTO E IMUNOFENOTIPAGEM DE CÉLULAS TRONCO ADIPOSAS PROVENIENTES DE TECIDO ADIPOSO EM PACIENTES SUBMETIDAS À LIPOASPIRAÇÃO
INTRODUÇÃO: O tecido adiposo tem se mostrado como fonte abundante, acessível e rica de células-tronco adultas multipotentes, denominadas células tronco adiposas, com características importantes para aplicação na medicina regenerativa e engenharia de tecidos. OBJETIVOS: Este trabalho tem como objetivo realizar lipoaspiração no abdômen, isolar células tronco adiposas do tecido adiposo do lipoaspirado, realizar a contagem de células viáveis e imunofenotipagem na amostra a fresco por citometria de fluxo, realizar a contagem de células viáveis e imunofenotipagem na amostra após cultivo por citometria de fluxo, comparar amostras a fresco e após cultivo. MATERIAL E MÉTODO: A amostra incluiu 11 pacientes submetidas a lipoaspiração no abdômen, onde foram retirados 200 ml de gordura para pesquisa de cada paciente. Foi realizado isolamento de células totais viáveis do lipoaspirado por processos químicos e enzimáticos, realizado a contagem dessas células a fresco e após cultivo por 10 dias por citometria de fluxo, e a imunofenotipagem com os marcadores celulares CD90, CD73, CD105, HLA, CD14, CD45, CD34. A leitura da marcação por citometria de fluxo foi realizada no material a fresco e após cultivo celular. RESULTADOS: O resultado da contagem de células totais viáveis a fresco variou entre 2 a 50 milhões de células e, após cultivo celular por 10 dias, variou entre 600 mil à 2 milhões de células. A imunofenotipagem no material a fresco evidenciou que os marcadores positivos CD90, CD73 e CD105 apresentaram respectivamente marcação de 37,53%, 50,34% e 4,21% em relação ao total de células marcadas. Os marcadores negativos CD14, CD45, CD34 e HLA apresentaram marcação de 3,59%, 25,3%, 1,57% e 47,6% respectivamente, demonstrando assim que havia contaminação por outros tipos celulares nos materiais frescos. CONCLUSÕES: Podemos concluir que o isolamento de célula tronco do lipoaspirado foi corretamente realizado, assim como a contagem celular de células viáveis a fresco e após cultivo celular. Existe maior número de células tronco adiposas após cultivo celular quando comparadas às amostras a fresco.
ISOLAMENTO E IMUNOFENOTIPAGEM DE CÉLULAS TRONCO ADIPOSAS PROVENIENTES DE TECIDO ADIPOSO EM PACIENTES SUBMETIDAS À LIPOASPIRAÇÃO
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DOI: 10.22533/at.ed.79319231220
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Palavras-chave: Célula tronco adiposa. Imunofenotipagem. Marcador celular
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Keywords: Adipose stem cell. Immunophenotyping. Cell marker.
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Abstract:
BACKGROUND: The adipose tissue is a rich and easy source of mesenchymal adult stem cell, called as adipose stem cell, with has an important role in regenerative medicine and tissue engineering. The isolation study of the adipose stem cell, viability, immunophenotyping and culture proliferation were widely studied otherwise it’s remaining some questions about these facts and the importance of continuing researches. AIM: This study has the objective of harvest adipose tissue from liposuction and isolation of adipose stem cell from it to account the amount of viable adults cells and immunophenotyping from fresh sample by flow cytometry, to account the amount of viable adults cells and immunophenotyping from culture sample by flow cytometry, and compare which sample has the better adipose stem cell quantity. MATERIAL AND METHOD: This study included 11 patients who undergo liposuction in the abdominal area, and was harvest 200 cc of adipose tissue of each patient. The isolation af adult stem cell included chemical and enzimatic process, cells account and immunophenotyping with CD markers CD90, CD73, CD105, HLA, CD14, CD45, CD34. The flow cytometry was performed in fresh and culture samples. RESULTS: The isolation of viable cells was performed without problems. The result of score of viable cells in the fresh sample was between 2 to 50 millions of cells and, after culture of 10 days, between 600 hundreds to 2 millions. Age and weight could affect this result. The immunophenotyping of positive markers CD90, CD73 and CD105 in fresh samples was 37,53%, 50,34% and 4,21% respectively and the markers CD14, CD45, CD34 and HLA was 3,59%, 25,3%, 1,57% and 47,6% respectively, pointing out that could be contamination of different cells in fresh samples. CONCLUSIONS: The conclusion is that isolation of adipose stem cell was correct and the account of viable adult cells was possible in fresh and after culture sample. The immunophenotyping is important to define an adipose stem cell but it’s not clear which one is the best for it. We can conclude that after culture we can obtain more adipose stem cell when compare with fresh sample.
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Número de páginas: 15
- Nicolau Gregori Czenko
- Ruth Maria Graf
- Daniele Helena Tanuri Pace
