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EXTRACCIÓN Y UTILIDAD DE DNA DE SEMEN BOVINO CONGELADO UTILIZANDO DIFERENTES CRIOPRESERVADORES

A través de las nuevas técnicas moleculares se desarrolló una estrategia de extracción de DNA a partir de semen bovino criopreservado con el fin de determinar la calidad y utilidad de DNA. En este trabajo se utilizó el material espermático de 15 sementales bovinos reproductivamente activos, cada semental fue sometido al proceso de extracción de semen utilizando un electroeyaculador, este se encarga de estimular por ondas de baja carga eléctrica las glándulas accesorias del aparato reproductor del macho bovino, cada muestra de semen fue recolectada en tubos graduados, se realizó un análisis macroscópico y un espermograma de cada muestra espermática obtenida de los distintos sementales, las muestras fueron diluidas en partes iguales con 3 diferentes crioprotectores, se empajilló ajustando la carga espermática a 20 millones y se congelaron las pajillas por enfriamiento lento en vapores de nitrógeno. Para el proceso de extracción de DNA de semen congelado se utilizaron dos protocolos, el tradicional método de fenol-cloroformo con proteínasa k (modificado) y el kit comercial de TRIzolTM Reagent. El DNA obtenido bajo los dos protocolos, se utilizó para medir su calidad y pureza con un NanoDrop® 2000 y se amplifico un fragmento del gen 16S rDNA para confirmar su utilidad en la amplificación mediante PCR de los genes de interés.
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EXTRACCIÓN Y UTILIDAD DE DNA DE SEMEN BOVINO CONGELADO UTILIZANDO DIFERENTES CRIOPRESERVADORES

  • DOI: https://doi.org/10.22533/at.ed.811112520032

  • Palavras-chave: molecular, extracción, DNA, PCR.

  • Keywords: molecular, extraction, DNA, PCR.

  • Abstract: Through the new molecular techniques a DNA extraction strategy was developed from cryopreserved bovine semen in order to determine the quality and usefulness of DNA. In this work the sperm material of 15 reproductively active bovine stallions was used, each stallion was subjected to the semen extraction process using an electroejaculator, this is responsible for stimulating the accessory glands of the reproductive system of the bovine male by waves of low electrical charge, each semen sample was collected in graduated tubes, a macroscopic analysis and a spermiogram of each sperm sample obtained from the different stallions was performed, the samples were diluted in equal parts with 3 different cryoprotectants, empajilló adjusted the sperm load to 20 million and The straws were frozen by slow cooling in nitrogen vapors. For the extraction process of frozen semen DNA, two protocols were used, the traditional method of phenol-chloroform with proteinase k (modified) and the commercial kit of TRIzolTM Reagent. The DNA obtained under the two protocols was used to measure its quality and purity with a NanoDrop® 2000 and a fragment of the 16S rDNA gene was amplified to confirm its usefulness in PCR amplification of the genes of interest.

  • Edgar Iván González Jiménez
  • Carlos Alberto Ramos Jonapa
  • Saúl Pardo Melgarejo
  • Lily Xóchitl Zelaya Molina
  • José Herrera Camacho
  • Marcelino Álvarez Cilva
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