EXTRAÇÃO DE DNA EM DIFERENTES TECIDOS DA ESPÉCIE LEGUMINOSA FORRAGEIRA Stylosanthes capitata VOGEL
O uso de marcadores moleculares em plantas requer DNA de boa qualidade e integridade, porém raramente se obtém o melhor material para sua extração. Neste estudo foi avaliada a eficiência da extração de DNA de quatro diferentes tecidos da espécie Stylosanthes capitata Vogel. O material utilizado foi: folhas cotiledonares frescas (FCtF); folhas frescas de plantas adultas congeladas (-20 ºC) (FFC); folhas secas de plantas adultas armazenadas a temperatura ambiente (11 meses) (FS) e inflorescências secas armazenadas a temperatura ambiente (7 meses) (IS). Para a extração do DNA foi utilizado um protocolo rápido de CTAB. Os DNAs das amostras foram quantificados seguindo as razões 260/280nm (~1,8) e 260/230nm (2,0-2,2) para verificar contaminação por proteínas e carboidratos, respectivamente. As amostras também foram submetidas a eletroforese em gel de agarose para verificar sua integridade e amplificadas com o marcador microssatélite SC 18-01 A2A, desenvolvido para a espécie. Como resultado observou-se que a concentração de DNA de FS e FCtF foram semelhantes (FS=288,39±27,11; FCtF=261,2±29,18) e maiores em comparação com as outras amostras (p<0,01). Os materiais de maior pureza foram observados em FCtF (260/280=1,90; 260/230=1,73 p<0,01), seguido por FS e FFC com resultados semelhantes para 260/280 (FS=1,78; FFC=1,89 p<0,05) e para 260/230 (FS=1,22; FFC=1,27). O DNA concentrado dos tecidos FCtF e FFC mostraram maior integridade seguido por FS, enquanto o IS não foi visualizado. Todas as amostras de FCtF, FFC e 44% de FS amplificaram com o marcador SSR, enquanto que para IS não foi observado produto de amplificação. Em todos os parâmetros, o DNA de IS obteve os menores valores (p<0,01) mostrando contaminação por carboidratos (260/230=0,28±0,06), possível consequência da alta concentração desses fotoassimilados nas inflorescências da planta no momento da coleta. Em resumo, excetuando IS, os DNAs de diferentes fontes de tecidos vegetais foram adequados para amplificação e análise de marcadores moleculares da espécie.
EXTRAÇÃO DE DNA EM DIFERENTES TECIDOS DA ESPÉCIE LEGUMINOSA FORRAGEIRA Stylosanthes capitata VOGEL
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DOI: 10.22533/at.ed.1652119036
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Palavras-chave: Extração DNA; Tecidos vegetais; Pureza e integridade; Stylosanthes sp.
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Keywords: DNA extraction; Plant tissues; Purity and integrity; Stylosanthes
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Abstract:
The use of molecular markers in plants requires DNA of good quality and integrity; however the best material for their extraction is rarely obtained. In this study the efficiency of the DNA extraction of four different tissues of the species Stylosanthes capitata Vogel was evaluated. The material used was: fresh cotiledonous leaves (FCtF); fresh leaves of frozen adult plants (-20ºC) (FFC); dry leaves of adult plants stored at room temperature (11 months) (FS) and dry inflorescences stored at room temperature (7 months) (IS). For the extraction of DNA a fast protocol of CTAB was used. The DNAs of the samples were quantified following the ratios 260/280nm(~1.8) and 260/230nm(2.0-2.2) to verify contamination by proteins and carbohydrates, respectively. The samples were also submitted to agarose gel electrophoresis to verify their integrity and amplified with the microsatellite marker SC18-01A2A, developed for the species. As a result it was observed that the DNA concentration of FS and FCtF were similar (FS=288.39±27.11; FCtF=261.2±29.18) and higher in comparison with the other samples (p<0.01). The highest purity materials were observed in FCtF (260/280=1.90; 260/230=1.73 p<0.01), followed by FS and FFC with similar results for 260/280 (FS=1.78; FFC=1.89 p<0.05) and for 260/230 (FS=1.22; FFC=1.27). The concentrated DNA from the FCtF and FFC tissues showed greater integrity followed by FS, while the IS was not visualized. All samples of FCtF, FFC and 44% of FS amplified with the SSR marker, whereas for IS, no amplification product was observed. In all parameters. In all parameters, the IS DNA obtained the lowest values (p<0.01) showing carbohydrate contamination (260/230=0.28±0.06), possible consequence of the high concentration of these photoassimilates in the inflorescences of the plant at the time of collection. In summary, except for IS, the DNAs of different plant tissue were suitable for amplification and analysis of molecular markers of the species.
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Número de páginas: 13
- Carolina Costa Silva
- Priscila Marlys Sá Rivas
- Carlos Alberto Martinez
- Ana Lilia Alzate-Marin
- Fernando Bonifácio-Anacleto
