ESTUDO DA INTERAÇÃO E ENSAIO DE MUTAGÊNESE VISANDO O COMPLEXO eNOS-CALMODULINA POR ABORDAGENS in silico
Este trabalho se propõe analisar a interação entre as proteínas óxido nítrico sintase endotelial (eNOS) e a proteína calmodulina, responsáveis pela síntese do óxido nítrico presente no endotélio e que atua como um agente vaso dilatador. Uma vez que ainda existem muitas lacunas no conhecimento sobre os mecanismos moleculares de regulação da eNOS pela interação com a calmodulina, utilizamos de uma abordagem de bioinformática para tentar elucidar melhor o modo de interação entre essas duas proteínas. Com isso, o trabalho se estruturou da seguinte maneira: 1) Obtenção dos dados cristalográficos de ambas as proteínas na plataforma RCSB Protein Data Bank; 2) Realização de ensaios de ancoragem molecular entre essas duas proteínas por meio do servidor ClusPro; 3) Os resíduos de aminopacidos que mais contribuem para a formação do complexo proteína-proteína (hot spots) foram preditos pelo servidor KFC2; 4) Substituição pontual de um resíduo de aminoácido da sequência da eNOS conforme indicado pelo dbSNP; 5) Novo ensaio de ancoragem entre a calmodulina e a eNOS mutada a partir do ClusPro. Como resultado, pudemos identificar novos resíduos de aminoácidos promissores para serem alvos de estudos in vitro e que ajudariam a clarear os mecanismos moleculares da interação entre essas proteínas que coordenam importantes processos fisiológicos.
ESTUDO DA INTERAÇÃO E ENSAIO DE MUTAGÊNESE VISANDO O COMPLEXO eNOS-CALMODULINA POR ABORDAGENS in silico
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DOI: 10.22533/at.ed.40420240620
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Palavras-chave: eNOS; interação proteína-proteína; óxido nítrico.
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Keywords: eNOS; protein-protein interaction; nitric oxide.
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Abstract:
This work aims to analyze the interaction between the nitric oxide synthase endothelial proteins (eNOS) with calmodulin, responsible for the synthesis of the nitric oxide that are present in the endothelium and act as a vasodilating agent. Since there are still many gaps in the knowledge about the molecular mechanisms of eNOS’ regulation through the interaction with calmodulin, we use a bioinformatics approach trying to elucidate the mode of interaction between these two proteins. Thus, the work was structured as follows: 1) Obtaining crystallographic data of both proteins on the RCSB Protein Data Bank platform; 2) Conducting molecular anchoring assays between these two proteins using the ClusPro 2.0 webserver; 3) The amino acid residues that contribute most to the formation of the protein-protein complex (as known as hot spots) were predicted by the KFC2 webserver; 4) Point replacement of an amino acid residue of the eNOS sequence as indicated by the dbSNP; 5) New anchorage assays between calmodulin and the mutated eNOS utilizing the ClusPro 2.0 webserver. As result, we were able to identify new promising amino acid residues as targets of prospective studies that would help to clarify the molecular mechanisms of the interaction between these proteins that coordinate important physiological processes.
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Número de páginas: 12
- Olívia Basso Rocha
- Katheryne Lohany Barros Barbosa
- Livia do Carmo Silva
- Gabriela Danelli Rosa
- Jackeliny Garcia Costa
- Kleber Santiago Freitas
- Marcos Antonio Batista de Carvalho Júnior
