ESTUDO COMPARATIVO DE TÉCNICAS DE SECAGEM E PÓS FIXAÇÃO DE FIBROBLASTOS NIH 3T3 PARA ANÁLISE EM MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA
Este artigo investigou os efeitos de diferentes técnicas de preparação e relata a importância da preparo adequado de amostras de culturas de células aderidas bidimensionais (2D) de fibroblastos (NIH 3T3) para uma análise de qualidade em microscopia eletrônica de varredura (MEV). A técnica de secagem por ponto crítico (CPD) é a mais utilizada no preparo de amostras biológicas para análise da estrutura em MEV. No entanto, a disponibilidade do aparelho de secagem de ponto crítico pode impedir a análise da microestrutura. Além disso, a não realização do processo de pós-fixação (OsO4) pode interferir na preservação da amostra. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar qualitativamente, as técnicas de secagem e pós-fixação para preparo de amostras de fibroblastos murinos estabilizados (NIH 3T3) para MEV. Foram avaliadas as técnicas de secagem em estufa a 40 °C (OV), dessecador (DS), hexametildisilazano (HMDS) e secagem de ponto crítico (CPD), pós-fixados (PF) ou não pós-fixados (nPF). Como resultado, as micrografias sugerem que as amostras de cultura de células aderentes podem ser analisadas com técnicas de secagem mais simples, com resultados semelhantes ao processo de ponto crítico, comumente usado. Além disso, o processo de pós-fixação não apresentou diferenças significativas na morfologia celular pela técnica de secagem por HMDS. Entretanto, a pós-fixação é essencial para manter a integridade das amostras quando secas pela técnica de CPD. A ordem de qualidade de preservação da melhor para a pior amostra de culturas de células de fibroblastos NIH 3T3 analisadas neste estudo foi PF-CPD ≥ PF-HMDS ≥ nPF-HMDS > DS ≥ OV > nPF-CPD.
ESTUDO COMPARATIVO DE TÉCNICAS DE SECAGEM E PÓS FIXAÇÃO DE FIBROBLASTOS NIH 3T3 PARA ANÁLISE EM MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA
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DOI: 10.22533/at.ed.1472103118
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Palavras-chave: fibroblastos, células aderentes, microscopia eletrônica de varredura, técnicas de secagem, pós-fixação
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Keywords: fibroblasts; adherent cell culture; scanning electron microscopy; drying technique; post-fixation.
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Abstract:
This paper investigated the effects of different preparation techniques and reports the importance of proper sample preparation of two-dimensional (2D) fibroblast adhered cell cultures (NIH 3T3) for quality analysis in scanning electron microscopy (SEM). The critical point drying (CPD) technique is the most used to prepare biological samples for SEM structure analysis. However, the availability of the critical point drying apparatus may preclude microstructure analysis. In addition, not performing the post-fixation process (OsO4) may interfere with specimen preservation. Therefore, the objective of this study was to evaluate qualitatively, the drying and post-fixation techniques for sample preparation of stabilized murine fibroblasts (NIH 3T3) for SEM. Drying techniques by the oven at 40°C (OV), desiccator (DS), hexamethyldisilazane (HMDS), and critical point drying (CPD), post-fixed (PF) or not post-fixed (nPF) were evaluated. As a result, micrographs suggest that adherent cell culture samples can be analyzed with more straightforward drying techniques with results similar to the commonly used critical point process. In addition, the PF-HMDS and nPF-HMDS samples did not show significant morphological differences. However, the post-fixation step for CPD is essential to maintain the integrity of the samples. The order of preservation quality from best to worst sample of NIH 3T3 fibroblast cell cultures analyzed in this study was PF-CPD ≥ PF-HMDS ≥ nPF-HMDS > DS ≥ OV > nPF-CPD.
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Número de páginas: 15
- Giulia Galani Martha
- Ana Paula Lorenzen Voytena
- Deise Rebelo Consoni
- Marcelo Maraschin
- Susane Lopes
