EFICÁCIA DA FOSFOLIPASE D RECOMBINANTE DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS NA COMPOSIÇÃO DE VACINA DE SUBUNIDADE PARA A LINFADENITE CASEOSA
As vacinas comercialmente disponíveis para a linfadenite caseosa (LC)
apresentam limitações, baixa eficácia e reações adversas, sendo constante a busca
por novos alvos. A fosfolipase D (PLD) surge como um dos principais fatores de
virulência, atuando como fator de permeabilidade e contribuinte para a propagação
da infecção de Corynebacterium pseudotuberculosis. Objetivou-se avaliar a eficácia
da proteína rPLD em vacina recombinante de subunidade. Um fragmento do gene
pld foi amplificado e clonado no vetor pAE. O plasmídeo transformado em Escherichia
coli Star e a proteína expressa e purificada. Realizados experimentos de imunização
e desafio em camundongos Balb/c (CEEA UFPel nº 2422). Em grupos: G1, 300 μl
solução salina 0,9%; via s.c.; G2, 50 μg de rPLD + 7,5 μg de saponina em 300 μl, via
s.c.; e G3, bacterina da cepa MIC-6 de C. pseudotuberculosis. ELISA indireto foi
realizado para avaliar os níveis IgG total, IgG1 e IgG2a. Desafio realizado com a cepa
MIC-6 (UFC) de C. pseudotuberculosis no dia 42 pós-imunização e os animais
observados por 30 dias. Observou-se que a rPLD foi capaz de induzir proteção de
30% nos camundongos desafiados. Níveis de IgG total específica para rPLD se
mostraram estatisticamente maiores no grupo experimental G2 em relação aos
controles, em ambos dias. IgG1 e IgG2a também demonstraram níveis elevados em
G2 no dia 42, sugerindo perfil misto de resposta imune Th1/Th2. A proteína rPLD
apresentou-se promissora na formulação de vacinas de subunidade para LC, uma
vez que foi capaz de induzir proteção parcial e resposta humoral em camundongos.
EFICÁCIA DA FOSFOLIPASE D RECOMBINANTE DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS NA COMPOSIÇÃO DE VACINA DE SUBUNIDADE PARA A LINFADENITE CASEOSA
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Palavras-chave: Corynebacterium pseudotuberculosis, Fosfolipase D., Vacina recombinante de subunidade, Linfadenite caseosa.
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Keywords: Corynebacterium pseudotuberculosis, Phospholipase D, Recombinant subunit vaccine, Caseous lymphadenitis.
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Abstract:
Commercially available vaccines for caseous lymphadenitis (LC) show
limitations, low efficacy and adverse reactions, and the search for new targets is
constant. Phospholipase D (PLD) appears as one of the main factors of virulence,
acting as a permeability factor and contributor to the spread of Corynebacterium
pseudotuberculosis infection. The objective of this study was to evaluate the efficacy
of the rPLD protein in a recombinant subunit vaccine. A fragment of the pld gene was
amplified and cloned into the pAE vector. The plasmid was transformed into
Escherichia coli Star and the protein expressed and purified. Immunization and
challenge experiments were performed in Balb/c mice (EAEC UFPel nº 2422). In
groups: G1, 300 μl saline solution 0.9%; Via s.c .; G2, 50 μg rPLD + 7.5 μg saponin in
300 μl via s.c.; And G3, bacterin of the C. pseudotuberculosis strain MIC-6. Indirect
ELISA was performed to assess total IgG, IgG1 and IgG 2a levels. Challenge with the
MIC-6 (CFU) strain of C. pseudotuberculosis at day 42 post-immunization and the
animals observed for 30 days. It was observed that rPLD was able to induce 30%
protection in the challenged mice. Total specific IgG levels for rPLD were statistically
higher in the G2 experimental group compared to the controls on both days. IgG1 and
IgG2a also demonstrated elevated G2 levels at day 42, suggesting a mixed Th1/Th2
immune response profile. The rPLD protein was promising in the formulation of LC
subunit vaccines as it was able to induce partial protection and humoral response in
mice.
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Número de páginas: 15
- Arthur Bertoldi Agostini
