EFEITOS ANTICOAGULANTE E ANTITROMBÓTICO DE INIBIDORES PROTEOLÍTICOS VEGETAIS
Os inibidores proteolíticos são metabólitos importantes em decorrência das múltiplas funções que exercem, incluindo a sua relevância para a regulação da cascata de coagulação sanguínea e fibrinólise. A caracterização estrutural desses inibidores poderá contribuir para elucidar os mecanismos de regulação desses processos e para demonstrar os potenciais terapêuticos dessas moléculas. Os inibidores foram extraídos em solução salina (0,15M, 10% p/v) e precipitação com acetona gelada 80% e purificados em colunas cromatográficas de troca iônica, exclusão molecular e afinidade. O grau de pureza foi monitorado por SDS-PAGE e a atividade inibitória foi realizada a 37oC na presença de substratos cromogênicos específicos para cada serinoprotease. A ação dos inibidores na cascata de coagulação sanguínea foi verificada pela realização dos ensaios TP e TTPa. O efeito de DrTI foi verificado em relação a agregação plaquetária ex vivo e em um modelo de trombose arterial carotídea em camundongos machos C57/BL6, tratados com 0,5 mg/Kg e 2 mg/Kg de DrTI, utilizando a emissão laser até atingir 0,03 mL/min ou menos. Os inibidores são do tipo Kunitz e seletivos para tripsina. Ficou evidenciado que esses inibidores atuam sobre a via intrínseca e comum da coagulação sanguínea, prolongando o tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). DrTI também inibiu a agregação plaquetária e potencialmente preveniu a formação de trombos em camundongo. CfTI, IcTI e DrTI são inibidores tipo Kunitz e atuam na cascata de coagulação sanguínea, sendo o DrTI também eficaz na prevenção de trombos.
EFEITOS ANTICOAGULANTE E ANTITROMBÓTICO DE INIBIDORES PROTEOLÍTICOS VEGETAIS
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DOI: 10.22533/at.ed.04821070113
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Palavras-chave: Inibidores. Serinoproteases. Coagulação Sanguínea. Kunitz. Fabaceae.
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Keywords: Inhibitors. Serine proteases. Blood coagulation. Kunitz. Fabaceae.
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Abstract:
The Proteolytic inhibitors are important metabolites due to the multiple functions they perform, including their relevance for the regulation of the blood coagulation cascade and fibrinolysis. The structural characterization of these inhibitors may contribute to elucidate the mechanisms for regulating these processes and to demonstrate the therapeutic potentials of these molecules. The inhibitors were extracted in saline solution (0.15M, 10% w/v) and precipitated with 80% cold acetone and purified on ion exchange, molecular exclusion and affinity chromatographic columns. The degree of purity was monitored by SDS-PAGE and the inhibitory activity was carried out at 37oC in the presence of specific chromogenic substrates for each serine protease. The action of inhibitors in the blood coagulation cascade was verified by performing the TP and aPTT assays. The effect of DrTI was verified in relation to ex vivo platelet aggregation and carotid arterial thrombosis model in male mice C57 / BL6, treated with 0.5 mg / kg and 2 mg / kg of DrTI, using laser emission until reaching 0.03 mL / min or less. The inhibitors are of the Kunitz type and selective for trypsin. It was evidenced that these inhibitors act in the intrinsic and common pathways of blood coagulation, prolonging the activated partial thromboplastin time (aPTT). DrTI also inhibited platelet aggregation and potentially prevented the formation of thrombus in mice. CfTI, IcTI and DrTI are Kunitz-type inhibitors and act in the blood coagulation cascade, and DrTI is also effective in preventing thrombus.
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Número de páginas: 6
- Silvana Cristina Pando
- BRUNO RAMOS SALU
- Luzia Aparecida Pando
- Vinicius Pereira da Silva Xavier
- Laura Maria Santos do Nascimento
- Maria Luiza Vilela Oliva
