DISEÑO Y OPTIMIZACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE UN ANTÍGENO DE FUSIÓN MEDIANTE INGENIERÍA DE LA TRADUCCIÓN PARA USO EN DIAGNÓSTICO DE LA TB

• DOI: 10.22533/at.ed.4972303081

• Palavras-chave: proteína recombinante, ingeniería de traducción, inmuno-diagnóstico, antigenicidad, E. coli

• Keywords: proteína recombinante, ingeniería de traducción, inmuno-diagnóstico, antigenicidad, E. coli

• Abstract:

  La biología sintética y la bioingeniería han permitido acelerar la velocidad para generar biotecnológicamente nuevas moléculas con características bioactivas, plataformas que junto a la inmunoproteómica están permitiendo la generación de nuevas moléculas blanco del sistema inmunitario en el combate de las enfermedades infecciosas. Entre las proteínas antigénicas más usadas y reconocidas para mejorar el diagnóstico de la tuberculosis (TB) destacan los antígenos de virulencia ESAT6 y CFP10, sin embargo, su producción usando cultivos de M. tuberculosis es de alto riesgo, lento y además con muy bajos rendimientos.  Una de las opciones de nueva generación es utilizar una estrategia biotecnológica de ingeniería de la traducción. Al generar un gen sintético artificial codificante para producir una proteína nativa de forma eficiente se optimizan las características fisicoquímicas de la molécula blanco para su expresión en E. coli. En este trabajo se obtuvo una sola proteína de fusión ESAT6:CFP10, generándose una molécula claramente soluble a partir de un cultivo bacteriano de fácil manipulación. La proteína recombinante se obtuvo después de la lisis celular de un cultivo bacteriano inducido mediante una purificación por cromatografía de afinidad. Se evaluó la capacidad inmuno-estimulante en cultivos de sangre periférica de animales con una infección tuberculosa activa mediante un inmunoensayo de ELISA para detectar interferón-gamma de bovino. La molécula recombinante demostró un alto potencial para despertar la producción de interferón-gamma, aumentando la sensibilidad del diagnóstico de la infección tuberculosa animal. La generación del gen sintético de ESAT6:CFP10 para E. coli demuestra que la plataforma de diseño molecular utilizada para obtener un reactivo biológico complejo resulta ser una buena estrategia rentable para la producción a gran escala de estructuras multi-epítopo con propiedades antigénicas sostenidas con fines inmuno-diagnósticos.