Detection of Toxocara canis DNA in tissues of experimentally infected mice
O principal agente etiológico da toxocaríase é o helminto Toxocara canis. Diversas dificuldades são encontradas no diagnóstico desta doença, devido a sinais clínicos inespecíficos e possíveis reações cruzadas que podem ocorrer no teste disponível, o ELISA indireto. Portanto, o diagnóstico molecular tem sido indicado como uma alternativa ao diagnóstico convencional. O objetivo deste estudo foi avaliar a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a identificação de T. canis em tecidos de camundongos experimentalmente infectados. Para tanto, nove camundongos foram inoculados com 1500 ovos embrionados e divididos em dois grupos, o primeiro eutanasiado 48 horas (G1) e o outro 30 dias pós-inoculação (G2). Pulmões, cérebro, fígado e sangue foram coletados de todos os animais para extração de DNA e digestão de tecidos, também foram coletadas amostras de sangue para extração de DNA e teste ELISA (soro). O DNA de Toxocara canis foi identificado em todos os animais inoculados usando o gene alvo ITS-2. O teste de PCR identificou com sucesso o parasita no cérebro, pulmão e fígado dos animais eutanasiados 48 h PI e 30 dias PI. Essa técnica rendeu bons resultados na identificação do parasita no cérebro, sendo mais sensível que o método de recuperação de larvas, no grupo com infecção aguda (48 h PI). A infecção foi confirmada por PCR em até 48 h após a infecção, enquanto o ELISA indicou que a conversão sorológica ocorreu apenas 14 dias após a inoculação. Este estudo demonstra a capacidade da PCR para identificar T. canis no fígado, pulmões e cérebro durante a infecção aguda e crônica.
Detection of Toxocara canis DNA in tissues of experimentally infected mice
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DOI: 10.22533/at.ed.6502211022
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Palavras-chave: Toxocaríase, Cérebro, PCR, Diagnóstico
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Keywords: Toxocariasis, Brain, PCR, Diagnosis
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Abstract:
The main etiological agent of toxocariasis is the helminth Toxocara canis. Several difficulties are found in the diagnosis of this disease, because of nonspecific clinical signs and possible cross-reactions that may occur in the available test, the indirect ELISA. Therefore, molecular diagnosis has been indicated as an alternative to conventional diagnosis. The purpose of this study was to evaluate the polymerase chain reaction (PCR) technique for the identification of T. canis in tissues of experimentally infected mice. To this end, nine mice were inoculated with 1500 embryonated eggs and were divided into two groups, the first euthanized 48 hours (G1) and the other 30 days post inoculation (G2). Lungs, brain, liver and blood were collected from all the animals for DNA Extraction and tissue digestion, also was collected blood samples for DNA extraction and ELISA test (serum). Toxocara canis DNA was identified in all the inoculated animals using the ITS-2 target gene. The PCR test successfully identified the parasite in the brain, lung and liver of the animals euthanized 48 h PI and 30 days PI. This technique yielded good results in the identification of the parasite in the brain, being more sensitive than the method for the recovery of larvae, in the group with acute infection (48 h PI). The infection was confirmed by PCR within 48 h after infection, while the ELISA indicated serological conversion occurred only 14 days after inoculation. This study demonstrates the ability of PCR to identify T. canis in the liver, lungs and brain during acute and chronic infection.
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Número de páginas: 26
- Marcia Raquel Pegoraro de Macedo
- Wesley Douglas da Silva Tertoa
- Luciana Farias da Costa Avila
- Fabio Pereira Leivas Leite
- Carlos Jaime Scaini
- Natália Berne Pinto
- Gabriela de Almeida Capella
- Adriane Leites Strothmann
- Marcos Marreiro Villela
- Maria Elisabeth Aires Berne
- Micaele Quintana de Moura
