CULTURA PRIMÁRIA DE QUERATINÓCITOS A PARTIR DO BULBO CAPILAR HUMANO
Na constituição celular da epiderme, os queratinócitos tem como principal função a renovação epitelial, sendo o bulbo capilar uma fonte constante de queratinócitos germinativos. A utilização do cultivo primário, como os queratinócitos, muitas das características de origem são preservadas, provendo assim, resultados mais próximos do fisiológico do tecido original. Este estudo objetivou realizar o cultivo de queratinócitos de origem primária a partir de bulbo capilar humano. Após a extração e coleta de bulbos capilar de voluntários, estes foram acondicionados em um tubo falcon de 15 ml contendo uma solução tampão fosfato-salina suplementada com antimicrobianos. A amostra foi centrifugada, ressuspensa em tripsina e incubada a 37 ˚C durante 5 min. Após a obtenção do pellet de células, foram ressuspensos em meio de cultivo modificado de Eagle suplementado com antimicrobianos. As células foram semeadas em placa de 24 poços a 37 ˚C com 5% de CO2. A cada 72 horas foram observados as células e o meio de cultivo trocado. Após a confluência de 80%, foi realizado a primeira passagem e assim sucessivamente acompanhando diariamente sua morfologia até a inviabilização dos fibroblastos. Foi possível isolar e cultivar queratinócitos com diferenciação morfológica e células ativas em 9 dias. Após a diferenciação celular, os queratinócitos foram confirmados pelo aspecto arredondados e poligonais achatados. A confluência celular foi presenciada no 15º dia. Após o procedimento de passagem foi observado baixo crescimento e decaimento exponencial da viabilidade celular, inviabilizando o cultivo celular dos queratinócitos no 20º dia. Foi estabelecido o cultivo de queratinócitos de origem primária a partir de bulbo capilar humano a fim de disponibilizar para estudos farmacológicos e microbiológicos in vitro.
CULTURA PRIMÁRIA DE QUERATINÓCITOS A PARTIR DO BULBO CAPILAR HUMANO
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DOI: 10.22533/at.ed.22120250921
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Palavras-chave: Pele humana, cultura primária, cultura de queratinócitos, monocultura, diferenciação celular.
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Keywords: Human skin, primary culture, keratinocyte culture, monoculture, cell differentiation
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Abstract:
In the cellular constitution of the epidermis, keratinocytes have the main function of epithelial renewal, with the hair bulb being a constant source of germinative keratinocytes. The use of primary culture, such as keratinocytes, many of the original characteristics are preserved, thus providing results closer to the physiological of the original tissue. This study aims to culture keratinocytes of primary origin from the human hair bulb. After extraction and collection of hair bulbs from volunteers, they were placed in a 15 ml falcon tube containing a phosphate-saline buffer solution supplemented with antimicrobials. The sample was centrifuged, resuspended in trypsin and incubated at 37 ˚C for 5 min. After obtaining the cell pellet, they were resuspended in modified Eagle culture medium supplemented with antimicrobials. The cells were seeded in a 24-well plate at 37 ˚C with 5% CO2. Every 72 hours the cells and the culture medium changed were observed. After the confluence of 80%, the first passage was performed and so on, daily following its morphology until the fibroblasts became unfeasible. It was possible to isolate and grow keratinocytes with morphological differentiation and active cells in 9 days. After cell differentiation, keratinocytes were confirmed by the rounded and flattened polygonal appearance. Cellular confluence was seen on the 15th day. After the passage procedure, low growth and exponential decay of cell viability was observed, making the cell culture of keratinocytes unfeasible on the 20th day. The cultivation of keratinocytes of primary origin from the human hair bulb was established in order to make it available for pharmacological and microbiological studies in vitro.
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Número de páginas: 16
- Beatriz Vesco Diniz
- Larissa Miwa Kikuchi Ochikubo
- Thais Emiko Kawasaki
- Flávia Franco Veiga
- Melyssa Fernanda Norman Negri
- Elton da Cruz Alves Pereira
