CLONAGEM DO GENE CORE DO VÍRUS DA HEPATITE C EM VETORES BINÁRIOS PARA DIRECIONAMENTO A DIFERENTES COMPARTIMENTOS DA CÉLULA VEGETAL
O vírus da Hepatite C (HCV) causa
doença de caráter agudo ou crônico, responsável
pela morte de aproximadamente 400 mil
indivíduos ao ano. O diagnóstico tardio é um dos
principais obstáculos ao tratamento da hepatite
C, demandando o desenvolvimento de kits de
diagnóstico simples, acessíveis e seguros.
A produção de proteínas recombinantes em
plantas surge como ferramenta para a produção
desses kits, mas estratégias de otimização são
necessárias para a obtenção de níveis ótimos
das proteínas de interesse. O objetivo do trabalho
foi clonar o gene codificante para a proteína
do Core do HCV em vetores binários com
direcionamento para diferentes compartimentos
da célula vegetal. A sequência codificante foi
otimizada e sintetizada, sendo posteriormente
recombinada por meio do sistema Gateway
de um plasmídeo de clonagem para diferentes
plasmídeos de expressão, com direcionamento
para os seguintes compartimentos celulares:
apoplasto, cloroplasto, vacuolo, citosol e retículo
endoplasmático. Os plasmídeos resultantes
da recombinação foram transformados
em Escherichia coli DH10b para posterior
confirmação da clonagem por PCR sobre
colônias. O presente trabalho clonou de forma
bem-sucedida a proteína Core do HCV em
plasmídeos com diferentes direcionamentos
na célula vegetal. Abrem-se assim, novas
possibilidades de otimização da produção da
proteína de interesse em planta, viabilizando o
seu uso para a produção de kits de diagnóstico
para a hepatite C.
CLONAGEM DO GENE CORE DO VÍRUS DA HEPATITE C EM VETORES BINÁRIOS PARA DIRECIONAMENTO A DIFERENTES COMPARTIMENTOS DA CÉLULA VEGETAL
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DOI: 10.22533/at.ed.1071911021315
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Palavras-chave: Hepatite C, Direcionamento celular, Plataforma Vegetal, Clonagem Molecular.
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Keywords: Hepatitis C, Cell Targeting, Plant Shelf, Molecular Cloning.
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Abstract:
Hepatitis C virus (HCV) is
responsible for the death of approximately
400,000 individuals per year. Late diagnosis
is one of the main obstacles to the treatment
of hepatitis C, requiring the development of
simple, accessible and safe diagnostic kits. The
production of recombinant proteins in plants
appears as a tool for the production of these
kits. Optimization strategies are required to
obtain optimum levels of the proteins of interest. This work aimed to clone the gene coding for the HCV Core protein in binary vectors
targeting different compartments of the plant cell. The coding sequence was optimized,
synthesized and subsequently recombined using the Gateway system. Expression
vectors targeting the following cellular compartments: apoplast, chloroplast, vacuole,
cytosol and endoplasmic reticulum were used. Plasmids resulting from recombination
were transformed into Escherichia coli DH10b and further evaluated by colony PCR.
The present work successfully cloned the HCV Core protein in plasmids with different
directions in the plant cell. This opens new possibilities for optimizing the production
of the protein of interest in the plant, making possible its use for the production of
diagnostic kits for hepatitis C.
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Número de páginas: 15
- Bruno Bezerra da SIlva
- Lucelina da Silva Araújo
- Eduarda Nattaly Ferreira Nobre Santos
- Eridan Orlando Pereira Tramontina Florean
- Maria Izabel Florindo Guedes
- ARNALDO SOLHEIRO BEZERRA
