BANDEAMENTO CROMOSSÔMICO E ESTIMATIVA DO CONTEÚDO DE DNA EM Dietes bicolor (IRIDACEAE), UMA IMPORTANTE ESPÉCIE ORNAMENTAL
O gênero Dietes (Iridaceae), descatase por possuir espécies amplamente usadas
na ornamentação devido à presença de flores
exuberantes de fácil cultivo e boa adaptação
a diversos tipos de solos. Embora as espécies
sejam bastante utilizadas no paisagismo de
casas, praças e jardins, pouco se sabe sobre
a constituição cromossômica das espécies. O
objetivo do presente trabalho foi caracterizar
citogeneticamente a espécie Dietes bicolor
por meio de análises de bandeamento com
fluorocromos base-específicos (DAPI/CMA3
)
e estimar a quantidade de DNA nuclear por
meio de citometria de fluxo. Para isso, folhas
do padrão de referência (Pisum sativum) foram
maceradas juntamente com folhas jovens de
D. bicolor, em tampão WPB. A suspensão de
núcleos resultante foi filtrada em uma malha de
40µm e então foi adicionado 30µL do corante
iodeto de propídeo (1mg/ml). As amostras foram
analisadas em triplicas no citômetro de fluxo. Para
a análise citogenética, meristemas radiculares
oriundos de sementes foram pré-tratados
com solução bloqueadora 8-hidroxiquinoleína
(0,003M) por 10h e fixados em etanol e ácido
acético (3:1). A digestão da parede celular foi
realizada com solução enzimática Pectinase
Celulase (2:20) durante 3h a 37ºC, em seguida
lâminas foram confeccionadas por meio
da técnica de dissociação celular seguida
de secagem ao ar. Lâminas previamente
analisadas foram submetidas ao bandeamento
com os fluorocromos DAPI (específico para
regiões ricas em AT) e Cromomicina A3
(específico para regiões CG), permitindo a
identificação de regiões heterocromáticas.
A partir dos resultados, obtidos foi possível
identificar que a espécie possui 2C = 17,93 pg
de DNA. O cariótipo é composto por 2n = 40
cromossomos, apresentando 8 sítios terminais
CMA+/DAPI-
, sendo sete marcas localizadas em
braços curtos e uma marca localizada no braço longo. Estas informações são inéditas para a espécie e contribuem para uma melhor
caracterização cariotípica de D. bicolor, uma importante espécie ornamental.
BANDEAMENTO CROMOSSÔMICO E ESTIMATIVA DO CONTEÚDO DE DNA EM Dietes bicolor (IRIDACEAE), UMA IMPORTANTE ESPÉCIE ORNAMENTAL
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DOI: 10.22533/at.ed.7212030017
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Palavras-chave: citogenética; cromossomo; citometria de fluxo.
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Keywords: chromosome; cytogenetics; flow cytometry.
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Abstract:
The genus Dietes (Iridaceae), is known to present species widely used
in ornamentation due to the presence of beautiful flowers of easy cultivation and good
adaptation to various types of soil. Although the species are widely used in the landscaping
of houses, squares and gardens, little is known about the chromosomal constitution of
the species. The aim of present work was to characterize the species Dietes bicolor by
base-specific fluorochromes (DAPI/CMA3
) banding analysis and to estimate the amount
of nuclear DNA by flow cytometry. For this, reference standard leaves (Pisum sativum)
were macerated with young leaves of D. bicolor in WPB buffer. The nuclei suspension
was filtered through a 40µm mesh and then 30µl of the propidium iodide (1mg / ml)
was added. Samples were analyzed in triplicate on the flow cytometer. For cytogenetic
analysis, root meristems from seeds were pretreated with 8-hydroxyquinoline solution
(0.003M) for 10h and fixed in ethanol and acetic acid (3v: 1v). Cell wall was removed
with Pectinase and Cellulase (2:20) solution for 3h at 37°C. Slides were prepared
by cellular dissociation technique followed by air drying. Previously analyzed slides
were stained with DAPI (specific for AT rich regions) and Chromomycin A3
(specific
for CG regions) fluorochromes, in order to detect heterochromatic regions. From the
results, it was possible to identify that the species has 2C = 17.93 pg of DNA content.
The karyotype is composed of 2n = 40 chromosomes, with 8 CMA+/DAPI-
terminal
sites, seven marks located in short arms and one mark located in the long arm. This
is the first description of heterochromatin distribution for the species and contributes
to a better karyotypic characterization of D. bicolor, an important ornamental species.
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Número de páginas: 13
- Isabel Teresa Silva Souza
- Saulo Marçal de Sousa
- Aryane Campos Reis
