AVALIAÇÃO DO CRESCIMENTO BACTERIANO POR CITOMETRIA DE FLUXO E PRODUÇÃO DE ANTÍGENOS SECRETADOS DE DIFERENTES CEPAS DE Corynebacterium pseudotuberculosis
Introdução: Corynebacterium pseudotuberculosis, é o patógeno responsável pela Linfadenite Caseosa (LC) que é uma doença infecto-contagiosa que compromete economicamente a pecuária. A infecção em humano ocorre pelo manejo de animais, consumo de seus derivados crus ou em laboratórios, com poucos casos descritos e apenas um estudo no Brasil. A identificação bacteriana proveniente do conteúdo caseoso, seguido por testes bioquímicos constitui atualmente o teste padrão ouro de diagnóstico. Objetivo: O presente trabalho se propõe a avaliar e comparar o crescimento bacteriano e a produção de antígenos para avaliação da sororreatividade humana de três cepas de Corynebacterium pseudotuberculosis. Métodos: Para contagem bacteriana e estudo da viabilidade celular em FACSCalibur (BD) foram realizados cultivos da cepa VD57 para os três tempos (24, 48, 72 horas) e comparação com cepas CAP3W(21) e CAPJ4(76) em 24 e 48 horas. Para produção do antígeno, foi utilizado o sobrenadante do cultivo com 48 horas das cepas VD57, CAP3W(21) e CAPJ4(76), semi-purificados por técnica de partição em três fases (TPP). Foi produzido extrato em meio com e sem Tween-80 somente para cepa CAPJ4(76). O perfil eletroforético dos quatro extratos foi analisado por SDS-PAGE em gel 12% e a sororreatividade avaliada em Western Blot com pool de amostras séricas do grupo Não Contactante (composto por 4 participantes sem histórico de contato com a bactéria ou consumo de carne crua ou mal cozida), grupo Contactante laboratório (composto por 4 indivíduos com histórico de contato por atividade em laboratório de microbiologia) e grupo Contactante fazenda (composto por 4 indivíduos com histórico de contato com animais infectados). Resultados: Na avaliação por FACs, evidenciou-se crescimento celular mais acelerado para cepa VD57 com resultado 10 vezes superior ao registrado por CAP3W(21) e CAPJ4(76). O ápice da viabilidade celular registrado foi de 48 horas, porém não foi identificada variação considerável da mortalidade celular com 72 horas. O perfil eletroforético dos extratos produzidos revelou diferenças na expressão de proteínas entre as três cepas, bem como para cultivos em condições diferentes para CAPJ4(76). Foi registrada intensa sororreatividade humana aos quatro extratos, confirmando a presença de proteínas antigênicas em todas as cepas, porém foi possível identificar diferença no perfil de reconhecimento entre os grupos Contactantes e Não Contactantes apenas no extrato VD57. Conclusão: A cepa VD57 apresenta ápice do crescimento e viabilidade no tempo de 48 horas de cultivo e na comparação entre as três cepas, demonstra crescimento e viabilidade superiores ao das demais. O perfil eletroforético dos extratos de cepas de Corynebacterium pseudotuberculosis cultivadas sob mesmas condições, apresentam similaridade no número de bandas e diferença no peso molecular. A utilização de Tween-80 no meio de cultivo, gera um acréscimo de 50% no número de bandas para CAPJ4(76). Todos os extratos produzidos apresentam antigenicidade para soro humano, porém é possível evidenciar diferença no perfil de Contactantes do perfil de Não Contactantes apenas em VD57.
AVALIAÇÃO DO CRESCIMENTO BACTERIANO POR CITOMETRIA DE FLUXO E PRODUÇÃO DE ANTÍGENOS SECRETADOS DE DIFERENTES CEPAS DE Corynebacterium pseudotuberculosis
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DOI: 10.22533/at.ed.2192230036
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Palavras-chave: Corynebacterium pseudotuberculosis; Contagem Bacteriana; Sororreatividade Humana
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Keywords: Corynebacterium pseudotuberculosis; Bacterial Count; Human Seroreactivity
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Abstract:
Introduction: Corynebacterium pseudotuberculosis is the pathogen responsible for Caseous Lymphadenitis (CL) which is an infectious disease that economically compromises livestock. Infection in humans occurs by handling animals, consumption of their raw derivatives or in laboratories, with few cases described and only one study in Brazil. Bacterial identification from caseous content, followed by biochemical tests, is currently the gold standard diagnostic test. Objective: The present work aims to evaluate and compare bacterial growth and antigen production for the evaluation of human seroreactivity of three strains of Corynebacterium pseudotuberculosis. Methods: For bacterial counts and cell viability studies in FACSCalibur (BD), cultures of the VD57 strain were performed for the three times (24, 48, 72 hours) and compared with CAP3W(21) and CAPJ4(76) strains in 24 and 48 hours. For antigen production, 48-hour culture supernatant of strains VD57, CAP3W(21) and CAPJ4(76), semi-purified by three-phase partition technique (TPP) was used. Extract was produced in medium with and without Tween-80 only for the CAPJ4 strain(76). The electrophoretic profile of the four extracts was analyzed by SDS-PAGE in 12% gel and the seroreactivity was evaluated by Western Blot with a pool of serum samples from the Non-Contacting group (composed of 4 participants with no history of contact with the bacteria or consumption of raw or undercooked), laboratory contact group (composed of 4 individuals with a history of contact due to activity in a microbiology laboratory) and farm contact group (composed of 4 individuals with a history of contact with infected animals). Results: In the evaluation by FACs, faster cell growth was observed for strain VD57, with a result 10 times higher than that recorded by CAP3W(21) and CAPJ4(76). The peak of cell viability recorded was 48 hours, but no considerable variation in cell mortality was identified at 72 hours. The electrophoretic profile of the extracts produced revealed differences in protein expression between the three strains, as well as for cultures under different conditions for CAPJ4(76). Intense human seroreactivity to the four extracts was recorded, confirming the presence of antigenic proteins in all strains, but it was possible to identify a difference in the recognition profile between the Contacting and Non-Contacting groups only in the VD57 extract. Conclusion: The VD57 strain presents apex of growth and viability in the time of 48 hours of cultivation and in the comparison between the three strains, it demonstrates growth and viability superior to the others. The electrophoretic profile of extracts of Corynebacterium pseudotuberculosis strains cultivated under the same conditions, show similarity in the number of bands and difference in molecular weight. The use of Tween-80 in the culture medium generates a 50% increase in the number of bands for CAPJ4(76). All extracts produced have antigenicity for human serum, however, it is possible to show a difference in the profile of Contacts from the profile of Non-Contactants only in VD57.
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Número de páginas: 31
- Lília Ferreira de Moura Costa
- Ramon Mendes dos Santos
- Rogério Reis Conceição
- Luiz Gustavo Freitas Oliveira
- Allan Souza dos Santos
- Mariane Melo dos Santos
- Alex José Leite Torres
- Maria da Conceição Aquino de Sá
- Fulvia Soares Campos de Sousa
- Marcos Borges Ribeiro
- Roberto José Meyer Nascimento
- Songeli Menezes Freire
- Caio Lopes Borges Andrade
