APLICACIÓN DE UNA PRUEBA DE PCR-RFLP EN EL DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN POR Babesia spp EN BOVINOS. ESTUDIO RETROSPECTIVO
Dentro de las enfermedades que ocasionan mayores pérdidas económicas en la ganadería bovina están aquellas transmitidas por garrapatas y que afectan considerablemente a las especies productivas, principalmente al ganado bovino. La babesiosis bovina es una enfermedad causada por los parásitos intra-eritrocíticos del género Babesia bovis y Babesia bigemina, en México y en otros países de Latinoamérica, es transmitida por la garrapata Rhipicephalus microplus y Rhipicephalus annulatus. Actualmente la técnica de laboratorio utilizada rutinariamente para el diagnóstico de la enfermedad aguda es el frotis de gota delgada teñido con colorante de Giemsa. Una de las técnicas con elevada sensibilidad analítica y más rápida que los métodos convencionales ha sido la prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) con el uso de iniciadores específicos. El objetivo de este trabajo estuvo dirigido a evaluar la capacidad diagnóstica de una prueba de PCR para Babesia spp, basada en oligonucleótidos género-específicos que amplifican una porción del gen DNA ribosomal, así como en la determinación de especie de Babesia mediante digestión del producto de amplificación con enzimas de restricción (PCR-RFLP). El trabajo se dividió en dos etapas, en el cual se incluyeron 22 animales Bos taurus de 6-10 meses de edad. La primera etapa experimental se realizó con un grupo de 4 animales esplenectomizados e infectados experimentalmente con 4 aislados de Babesia, 2 de B. bovis y 2 de B. bigemina, utilizando sangre criopreservada en nitrógeno líquido. Los animales fueron monitoreados diariamente durante 15 días pos-inoculación. La segunda fase, desarrollada en campo, se realizó con un lote de 18 bovinos previamente inmunizados con B. bigemina e introducidos un mes después a una zona endémica de babesiosis bovina en donde fueron monitoreados durante 21 días pos-introducción al potrero para evaluar la infección transmitida por Babesia spp. Los resultados del monitoreo demostraron que por microscopia óptica el promedio en días en que los animales fueron detectados como positivos fue de 7 días, mientras que por la prueba de PCR fue de 11 días. La utilización de enzimas de restricción en la prueba de PCR-RFLP permitió, además, identificar la especie involucrada en la infección. La prueba de PCR-RFLP aplicada es una herramienta molecular con elevada especificidad para la discriminación de las especies de Babesia bovis y Babesia bigemina en animales expuestos a garrapatas
APLICACIÓN DE UNA PRUEBA DE PCR-RFLP EN EL DIAGNÓSTICO DE LA INFECCIÓN POR Babesia spp EN BOVINOS. ESTUDIO RETROSPECTIVO
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DOI: 10.22533/at.ed.5812306045
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Palavras-chave: Babesia bovis, Babesia bigemina, PCR-RFLP.
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Keywords: Babesia bovis, Babesia bigemina, PCR-RFLP.
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Abstract:
Among the diseases that cause the greatest economic losses in livestock are those transmitted by ticks and that considerably affect productive species, mainly cattle. Bovine babesiosis is a disease caused by the intra-erythrocytic parasites Babesia bovis and Babesia bigemina, in Mexico and other Latin American countries. The pathogens are transmitted by the tick Rhipicephalus microplus and Rhipicephalus annulatus. Currently, the laboratory technique routinely used for the diagnosis of acute disease is the Microscopic examination of Giemsa-stained thin blood smears. One of the techniques with high analytical sensitivity and faster than conventional methods has been the Polymerase Chain Reaction (PCR) test with the use of specific primers. The objective of this work aimed to evaluate the diagnostic capacity of a PCR test for Babesia spp, based on genus-specific oligonucleotides that amplify a portion of the ribosomal DNA gene, as well as on the determination of Babesia species by digestion of the product of restriction enzyme amplification (PCR-RFLP). The work was divided into two stages, in which 22 Bos taurus of 6-10 months of age were included. The first experimental stage was carried out with a group of 4 splenectomized calfs and experimentally infected with 4 different Babesia isolates, 2 with B. bovis and 2 with B. bigemina, using blood cryopreserved in liquid nitrogen. The animals were monitored daily for 15 days post-inoculation. The second phase, developed in the field, was carried out with a batch of 18 steers previously immunized with B. bigemina and introduced one month later to an endemic area for bovine babesiosis where they were monitored for 21 days post-introduction to the pasture to evaluate the infection transmitted by Babesia spp. The monitoring results showed that by optical microscopy the average number of days in which the animals were detected as positive was 7 days, while by the PCR test it was 11 days. The use of restriction enzymes in the PCR-RFLP test also allowed the identification of the species involved in the infection. The applied PCR-RFLP test is a molecular tool with high specificity for the discrimination of Babesia bovis and Babesia bigemina species in animals exposed to ticks.
- Julio Vicente Figueroa Millán
- Pedro Julián Soberanis Bernal
- Roberto O. Castañeda Arriola
- Carmen Rojas Martínez
- José Juan Lira Amaya
- Jesús Antonio Álvarez Martínez
- Rebeca Montserrat Santamaría Espinosa
- Grecia Martínez García
