APLICABILIDADE DA BACTERIOLOGIA CONVENCIONAL E BIOLOGIA MOLECULAR PARA PESQUISA DE Listeria monocytogenes EM LEITE UAT
A Listeria monocytogenes geralmente é responsável por provocar a listeriose, que tem como principais manifestações clínicas: infecção inicial semelhante a um resfriado, com febre baixa, cefaleia, calafrios e mal-estar geral, podendo progredir para meningite, meningocefalite, septicemia, aborto ou parto prematuro. A taxa de mortalidade encontra-se na faixa de 20-30% dos casos diagnosticados. Os grupos mais susceptíveis, considerados grupos de risco, são mulheres grávidas (e seus fetos), crianças, idosos e indivíduos com o sistema imunológico comprometido. No Brasil, a Resolução RDC ANVISA/MS n.º 12, de 02 de janeiro de 2001 (BRASIL, 2001) estabelece os padrões microbiológicos para produtos alimentícios expostos à venda, sendo que o micro-organismo Listeria monocytogenes deve estar ausente em 25g do alimento. A bacteriologia convencional para a pesquisa de Listeria monocytogenes em alimentos é complexa, envolve duas ou até três formas de enriquecimento das amostras e mesmo assim, muitas vezes, têm-se resultados frustrados. Assim, este projeto teve o objetivo de validar a técnica de biologia molecular tradicional (Polymerase Chain Reaction - PCR) para detecção de Listeria monocytogenes em leite UAT (Ultra Alta Temperatura) e compará-la com a bacteriologia convencional. Para tanto, 144 amostras de leite estéreis foram artificialmente contaminadas com cepas padrões Listeria monocytogenes e analisadas, sob a forma de pool, pelas duas metodologias. Além disso, foram preparados controles positivos e negativos. O experimento teve quatro tempos de repetição e foi conduzido em triplicata. Os resultados obtidos pela metodologia da bacteriologia convencional são mais assertivos quando se quer uma análise qualitativa e quantitativa; enquanto a técnica de biologia molecular torna-se interessante para a análise qualitativa, detectando a contaminação pelo micro-organismo, mesmo em pequenas quantidades. Em seguida, verificou-se a aplicabilidade das duas técnicas propostas e adicionou-se a metodologia PCR Real Time para a pesquisa do micro-organismo estudado em 90 amostras de leite UAT, de 10 diferentes marcas, oriundas do comércio regional. O experimento teve três tempos de repetição e foi conduzido em triplicata. Ao analisar as amostras, sob a forma de 10 pool, apenas a metodologia PCR Real Time conseguiu detectar L. monocytogenes em uma das marcas analisadas. Assim, a biologia molecular se torna interessante para a indústria, tanto para a liberação de lotes quanto para a avaliação de higienização em linha de produção.
APLICABILIDADE DA BACTERIOLOGIA CONVENCIONAL E BIOLOGIA MOLECULAR PARA PESQUISA DE Listeria monocytogenes EM LEITE UAT
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DOI: 10.22533/at.ed.8862105213
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Palavras-chave: Listeria; Leite UAT; Microbiologia; Biologia Molecular
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Keywords: Listeria; Milk UHT; Microbiology; Molecular biology
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Abstract:
Listeria monocytogenes is usually responsible for causing listeriosis, which has the following clinical manifestations: initial infection similar to a cold, with a low fever, headache, chills and general malaise, and may progress to meningitis, meningocephalitis, septicemia, abortion or parturition premature. The mortality rate is in the range of 20-30% of diagnosed cases. The most susceptible groups, considered at-risk groups, are pregnant women (and their fetuses), children, the elderly, and individuals with compromised immune systems. In Brazil, Resolution RDC ANVISA / MS No. 12, of January 2, 2001 (BRAZIL, 2001) establishes the microbiological standards for food products exposed to the sale, and the microorganism Listeria monocytogenes should be absent in 25g of the food. Conventional bacteriology for the detection of Listeria monocytogenes in food is complex, involves two or even three forms of enrichment of the samples and even then, many times, frustrated results have been obtained. The aim of this project was to validate the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique for the detection of Listeria monocytogenes in Ultra High Temperature (UHT) milk and to compare it with conventional bacteriology. For this, 144 samples of sterile milk were artificially contaminated with standard strains Listeria monocytogenes and analyzed as a pool by the two methodologies. In addition, positive and negative controls were prepared. The experiment had four replicate times and was conducted in triplicate. The results obtained by the methodology of conventional bacteriology are more assertive when a qualitative and quantitative analysis is required; the technique of molecular biology becomes interesting for the qualitative analysis, detecting the contamination by the microorganisms, even in small amounts. Then, the applicability of the two proposed techniques was verified and the Real Time PCR methodology was used to investigate the microorganism studied in 90 UAT milk samples from 10 different brands from the regional trade. The experiment has three replicate times and was conducted in triplicate. When analyzing the samples as a pool, only the Real Time PCR methodology was able to detect L. monocytogenes in one of the analyzed brands. Thus, molecular biology becomes interesting for the industry, both for the batch release and for the hygiene evaluation in the production line.
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Número de páginas: 15
- Fábio Antônio Colombo
- Maria Clara Freitas de Assis
- Lívia do Nascimento Santana
- Sandra Maria Oliveira Morais Veiga
- POLYANA DE FARIA CARDOSO
