ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE MIR-15 E MIR-16 EM INFECÇÕES EXPERIMENTAIS POR VDEN1
A dengue é uma doença febril aguda causada por um vírus do gênero Flavivirus, família Flaviviridae, endêmica nas regiões tropicais e subtropicais do planeta. O agente é um vírus com RNA de fita simples, classificado em cinco sorotipos distintos: Vírus Dengue (VDEN) 1, 2, 3, 4 e 5. As respostas imunológicas inatas e adaptativas do hospedeiro exercem importante função na determinação da história natural das infecções virais, especialmente na dengue. Neste contexto vem sendo observado nos últimos anos que é cada vez mais comum a presença de pequenos RNAs nos processos de infecção viral, assim como de defesa imunológica, tornando necessário o melhor entendimento do papel destes pequenos RNAs durante a infecção viral por VDEN. Sendo assim, avaliamos a expressão dos miRNA-15, miRNA16 e das vias de caspase 3 e 7 em linhagens celulares contínuas/humanas durante a infecção pelos vírus DEN-1. As células foram extraídas utilizando beads magnéticas e guardadas a -70oC até o momento de uso, para a quantificação da carga viral foi utilizado o método TaqMan com sondas marcadas em conjunto com o método de quantificação por curva absoluta através de um plasmídeo clonado em vetor do genoma dos quatro sorotipos, além de sondas marcadas para os miRNA usados no estudo. A quantificação da via de caspase 3 e 7 foi realizado com o uso de marcadores utilizando luciferina. Foi possível observar uma relação entre as vias de apoptose e os miRNAs-15 e 16, além dos mesmos demonstrarem que células hepáticas de origem humana sofrem mais intenso processo de apoptose durante infecção por VDEN. Esses achados reforçam a hipótese que estes miRNAs estão envolvidos com o processo de apoptose durante a infecção por VDEN e que isto acaba por agravar a infecção principalmente nos hepatócitos.
ANÁLISE DA EXPRESSÃO DE MIR-15 E MIR-16 EM INFECÇÕES EXPERIMENTAIS POR VDEN1
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DOI: 10.22533/at.ed.0252016042
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Palavras-chave: Vírus Dengue; miRNA; Apoptose
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Keywords: Dengue virus; miRNA; Apoptosis
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Abstract:
Dengue is an acute febrile illness caused by a virus of the genus Flavivirus, family Flaviviridae, endemic in the tropical and subtropical regions of the planet. The agent has a single-stranded RNA virus, classified into five distinct Dengue Virus (DENV) serotypes 1, 2, 3, 4 and 5. Innate and adaptive immune responses play an important role in determining the natural history of viral infections, especially dengue. In this context it has been observed that the presence of small RNAs in the processes of viral infection, as well as immunological defense, is becoming increasingly common, making it necessary to better understand the role of these small RNAs during the viral infection by DENV. Therefore, we evaluated the expression of miRNA-15, miRNA16 and caspase 3 and 7 pathways in continuous/human cell line during infection with DENV-1. The cells were extracted using magnetic beads and stored at -70oC until the time of use. The TaqMan with probes method was used for the quantification of the viral load in conjunction with the absolute curve quantitation method using a cloned vector plasmid. genome of the four serotypes and labeled probes for the miRNAs. The quantification of the caspase 3 and 7 pathway was performed using luciferin markers. It was possible to observe a relationship between the apoptosis pathways and miRNAs-15 and 16 and the human liver cells undergo more intense apoptosis during DENV infection. These findings support the hypothesis that these miRNAs are involved in the apoptosis process during DENV infection may worsen the infection in hepatocytes.
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Número de páginas: 17
- Gustavo Moraes Holanda
- Walter Felix Franco Neto
- Jardel Fabio Lopes Ferreira
- Francisco Canindé Ferreira de Luna
- Ana Paula Sousa Araújo
- Taiana Andrade Freitas
- Carlos Alberto Marques de Carvalho
- Samir Mansour Moraes Casseb
- Karla Fabiane Lopes de Melo
