ADAPTAÇÃO DO MÉTODO CIRCULAR POLYMERASE EXTENSION CLONING NA CONSTRUÇÃO DE PLASMÍDEOS PARA MODIFICAÇÃO GENÉTICA DE MICRORGANISMOS
A modificação genética de microrganismos tem despertado interesse dos pesquisadores por permitir a viabilidade de certos processos biotecnológicos. Visando aumentar o rendimento de produtos de interesse farmacêutico, medicinal, cosmético, ambiental, biotecnológico, entre outros, diversos métodos de fusionamento de fragmentos de DNA já foram estudados, porém ainda existem certas dificuldades processuais quanto ao tamanho do plasmídeo a ser montado. Neste trabalho serão apresentadas algumas das principais técnicas de fusionamento de fragmentos de DNA, sendo detalhado o método Circular Polymerase Extension Cloning (CPEC) e sua verificação quanto a correta montagem dos fragmentos, empregando para isso a digestão por enzimas de restrição. No presente estudo foi desenvolvido um protocolo passo a passo do método CPEC na montagem de dois plasmídeos para modificação genética de microrganismos, de modo a permitir avanços biotecnológicos com maior efetividade. Foi possível identificar que o tamanho do plasmídeo não afetou o percentual de colônias corretas, e sim que outras características, como o CG%, a quantidade de pares de base (pb) sobrepostas com o vetor base, bem como entre os fragmentos, no qual afetam o sucesso da construção por CPEC.
ADAPTAÇÃO DO MÉTODO CIRCULAR POLYMERASE EXTENSION CLONING NA CONSTRUÇÃO DE PLASMÍDEOS PARA MODIFICAÇÃO GENÉTICA DE MICRORGANISMOS
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DOI: 10.22533/at.ed.5472101046
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Palavras-chave: Fusionamento de fragmentos de DNA, plasmídeos, protocolo, CPEC.
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Keywords: Assembling DNA fragments, plasmids, protocol, CPEC.
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Abstract:
The genetic modification of microorganisms has encouraged researchers for allowing the viability of certain biotechnological processes. In order to increase the yield of pharmaceutical, medicinal, cosmetic, environmental and biotechnological products, among others, several methods of assembling DNA fragments have already been studied, however there are still certain difficulties regarding process and plasmid size to be connected. In this work, some of the main techniques to assembly DNA fragments will be presented, highlighting the Circular Polymerase Extension Cloning (CPEC) method and its verification as to the correct assembly of the fragments, using digestion by restriction enzymes. In the present study, a step-by-step protocol of the CPEC method was developed to assembly two plasmids for the genetic modification of microorganisms, in order to allow biotechnological advances with greater effectiveness. It was possible to identify that plasmid size did not affect the percentage of correct colonies, but that other characteristics, such as CG%, the number of base pairs (bp) overlapped with the base vector, as well as between fragments, in which affect the success of construction by CPEC.
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Número de páginas: 14
- Nicole Dalonso
