Rickettsiose por imunofluorescência indireta e por PCR em tempo real
La rickettsiosis es la enfermedad transmitida por mordedura de garrapata y tarda en incubarse de 10 a 12 días luego de su exposición. Puede llegar a convertirse en un mal grave y puede ser mortal. El objetivo fue desarrollar la técnica de Inmunofluorescencia indirecta IgM para rickettsiosis y RT-PCR en tiempo real para identificar la presencia de ADN rickettsial en individuos infectados en la ciudad de Chihuahua. Estudio transversal, analítico, observacional. Muestra de 187 individuos con sintomatología característica de rickettsiosis. Se colectaron de manera directa muestras de sangre de individuos infectados, las muestras se llevaron para su análisis al laboratorio de referencia del Centro de Salud de la ciudad de Chihuahua. Se procedió al llenado de una encuesta y toma de muestra sanguínea para realizar extracción y purificación de ADN se realizó mediante el protocolo Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB). Para pruebas de PCR se utilizó el primer que amplifica el gen gltA en un rango de 380-397 pb. Bajo las condiciones estandarizadas del termociclador Select Cycler II (Select BioProducts ®, USA). El marcador de peso molecular (Hyperladder 100-pb – Bioline ®, USA), control positivo y productos obtenidos de PCR fueron teñidos con Gel Red (Biotium TM, USA) y observados en gel de agarosa 1%; para visualizar los resultados de productos se empleó fotodocumentador MiniBis Pro (Bio-Imaging Systems ®). Prueba de IFI con objetivo 40x (LEICA DMLS®). Se determinó la asociación entre los factores relacionados a la presencia de la enfermedad, los OR así como los Riesgos Relativos, IC 95%. De 187 muestras sanguíneas procesadas por PCR se obtuvieron 55 positivas (29.4%). Los anticuerpos IgM por IFI se detectaron en suero de 7 a 10 días de iniciados los síntomas con un total de 55 positivas, correlación del 100% entre métodos. Se analizó la asociación de factores que podrían estar relacionados a rickettsiosis en afectados. Las manifestaciones clínicas (lesiones) presentadas fueron petequias, piel moteada, eritematoso y macular, costra, equimosis, erupción maculosa y petequial, exantema, maculo papular y pústulas. No existe efecto de ningún factor en la regresión logística, inicio de síntomas y días de evolución, los demás factores están muy distanciados de la probabilidad 0.05 asociados a la presencia de rickettsiosis edad (8 meses a 73 años). Valores de disparidad e intervalo de confianza son muy cercanos a uno. La prueba IFI IgM podría ser aplicada en el diagnóstico de Rickettsiosis para estudios epidemiológicos y la PCR en tiempo real para detectar la presencia de ADN rickettsial en individuos infectados.
Rickettsiose por imunofluorescência indireta e por PCR em tempo real
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DOI: 10.22533/at.ed.813242230062
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Palavras-chave: Reservorio, rickettsiosis, vector, zoonosis, tifus, inmunofluorescencia, PCR.
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Keywords: Reservoir, rickettsiosis, vector, zoonosis, typhus, immunofluorescence, PCR
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Abstract:
Rickettsiosis is the disease transmitted by tick bites and it takes to incubate 10 to 12 days after exposure. It can become a serious evil and can be deadly. The objective was to develop the technique of indirect immunofluorescence IgM for rickettsiosis and RT-PCR in real time to identify the presence of rickettsial DNA in infected individuals in the city of Chihuahua. Cross-sectional, analytical, observational study. Sample of 187 individuals with characteristic symptoms of rickettsiosis. Blood samples from infected individuals were collected directly, the samples were taken for analysis to the reference laboratory of the Chihuahua City Health Center. A survey was completed and blood sampling to perform DNA extraction and purification was performed using the Cetyl Trimethyl Ammonium Bromide (CTAB) protocol. For PCR tests the first one that amplifies the gltA gene in a range of 380-397 bp was used. Under the standardized conditions of the Select Cycler II thermal cycler (Select BioProducts ®, USA). The molecular weight marker (Hyperladder 100-bp - Bioline ®, USA), positive control and PCR products were stained with Red Gel (Biotium TM, USA) and observed on 1% agarose gel; To visualize the results of products, MiniBis Pro (Bio-Imaging Systems ®) photodocumenter was used. IFI test with 40x objective (LEICA DMLS®). The association between the factors related to the presence of the disease, the OR as well as the Relative Risks, 95% CI was determined. Of 187 blood samples processed by PCR, 55 positives (29.4%) were obtained. IgM antibodies by IFI were detected in serum 7 to 10 days after the onset of symptoms with a total of 55 positive, 100% correlation between methods. The association of factors that could be related to rickettsiosis in affected patients was analyzed. The clinical manifestations (lesions) presented were petechial, mottled skin, erythematosus and macular, scab, ecchymosis, rash and petechial, rash, papular macula and pustules. There is no effect of any factor on the logistic regression, onset of symptoms and days of evolution, the other factors are very distant from the 0.05 probability associated with the presence of rickettsiosis age (8 months to 73 years). Values of disparity and confidence interval are very close to one. The IFI IgM test could be applied in the diagnosis of Rickettsiosis for epidemiological studies and real-time PCR to detect the presence of rickettsial DNA in infected individuals.
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Número de páginas: 12
- José Luis Ortega Sánchez
- Sara Linnet Luna Reyes
- Maribel Cervantes-Flores
- José de Jesús Alba-Romero
- Aurora Martinez Romero
